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产蛋白酶菌株的分离--第1页
产蛋白酶菌株的分离
一、教学目标及基本要求
1.学习从各种样品中分离微生物的操作技术
2.掌握分离微生物时定性测定产物的筛选方法
3.学习和掌握枯草芽孢杆菌的分离技术
4.掌握高产蛋白酶菌株的初筛方法
二、实验原理
枯草杆菌是属于芽孢杆菌属的一类细菌。枯草芽孢杆菌的分布
十分广泛，主要存在于土壤或腐烂的稻草之中。由于能够形成
芽孢，因此能够抵抗高温，低温等不良环境，所以是实验室及
工业生产中主要污染菌之一，危害极大。但是许多枯草芽孢杆
菌能分泌蛋白酶、淀粉酶、抗菌素等物质，是工业酶制剂生产
的重要菌种。例如，我国使用的BF7658枯草芽孢杆菌生产а-
淀粉酶，用于淀粉水解，纺织品退浆等。又如AS1398枯草杆
菌是生产蛋白酶的重要菌株。
1.枯草芽孢杆菌的芽孢耐热的特点。
由于芽孢具有较强的抗高温能力，分离纯化时可采用热处理的
方法，即通过高温加热杀死其中不生芽孢的菌种，使耐热的芽
孢菌得到富集。
2.枯草芽孢杆菌的产酶特征。
利用枯草芽孢杆菌产生水解酶的特性，可以选择酪蛋白或淀粉
为主要营养成分的分离培养基，因菌体分泌的酶可以将大分子
的蛋白或淀粉水解而在菌落周围形成透明圈。根据透明圈直径
(H)和菌落直径(C)之比值(H/C)可以初步确定酶活力，其比值
越大，酶活力越高，进而可筛选出高产酶活的菌株。
3.枯草芽胞杆菌的形态特征
产蛋白酶菌株的分离--第1页
产蛋白酶菌株的分离--第2页
枯草芽孢杆菌的细胞大小0.7×2～3μm，营养细胞为杆状，
杆端钝圆、单生或者短链，着色均匀，无荚膜，周边运动，革
兰氏染色阳性。有芽孢0.6×1～1.5μm，芽孢中生或近中生，
壁薄，不膨大，孢子呈椭圆或长筒形，常为两端染色。菌落变
化很大，枯草芽孢杆菌在麦芽汁琼脂培养基斜面上，菌落呈细
皱状，干燥或颗粒状。在土豆培养基上菌落呈细皱状，干燥，
有时呈现天鹅绒状的菌苔，在液体培养基表面形成银白色的菌
膜。菌落粗糙，扁平、扩展，不透明，不闪光，表面干燥，污
白色或微带黄色。
4.枯草芽胞杆菌的生理生化特性
枯草芽孢杆菌能够液化明胶，冻化牛乳，还原硝酸盐，不产
生吲哚，H2S，V-P反应阳性，水解淀粉。葡萄糖发酵产酸不
产气，需氧，适温25～31℃生长。
三、实验材料
1.样品：从地表下10~15cm的土壤或者枯枝烂叶、腐烂稻
草中用无菌小铲、纸袋取土样，
并记录取样的地理位置、pH、植被情况等。（学生自取）
2.培养基
①肉汤培养基（附录Ⅱ-1.1）：100mL/组，其中20mL液
体培养基/250mL△中（内装玻璃珠10颗）；50mL固体斜
面培养基分装在试管中：5mL/支，10支。
组成：牛肉膏0.5%蛋白胨1%NaCl0.5%pH7.2～
7.4121℃，
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