基于三维荧光光谱的槐米中黄酮类物质的醇提分析.docx

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基于三维荧光光谱的槐米中黄酮类物质的醇提分析

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姚涵寻粟晖温健姚志湘

摘要：利用荧光总体积积分算法，结合三维荧光光谱技术，对槐米甲醇提取液中的黄酮类物质进行分析.以芦丁为对照，以甲醇为提取溶剂，设置不同时间、溶剂倍量和温度的条件，分析各条件下槐米甲醇提取液中黄酮类物质的提取情况;并在中草药浸提数学模型的基础上对不同条件下槐米的浸提过程进行动力学验证.结果显示，槐米甲醇提取液中黄酮类物质提取的较优条件为：热力学温度333K，时间[≥]80min，溶剂倍量[≤]100;在浸提动力学研究中，lnC分别与lnt、ln（M-R）、（1/T）×103成线性关系，符合中草药浸提的数学模型.

关键词：槐米;黄酮类物质;醇提;三维荧光;动力学

：TQ91;R927.2?DOI：10.16375/j.cnki.cn45-1395/t.2021.02.015

0引言

槐米为豆科植物槐的干燥花蕾，具有清肝明目，凉血止血等功效，为常用中药[1].槐米中含有大量的黄酮类、多糖类、三萜皂苷类及醇类等成分，其中黄酮类含量高达20%以上，具有清除自由基、抗肿瘤、抗病毒等功效，也是槐米发挥药效的主要功能性成分[2-4].黄酮类物质不易溶于水，而易溶于醇，因此，用甲醇提取槐米中的黄酮类物质比用水提取效果更充分.

三维荧光光谱具有确定的维度优势，相比其他检测方法，三维荧光光谱法检测更灵敏，选择性更高，且取样容易，样品用量少，更方便快捷[5-7].研究中草药浸出过程的动力学关系，能够为有关中药提取的实验提供设计依据.张卫波等[8]通过对绞股蓝中的多糖进行提取，建立了多糖的提取动力学方程;魏小红等[9]用体积分数为90%的乙醇提取芹菜叶中的黄酮，并求得有关动力学参数;邓辉等[10]建立了丹参中的丹酚酸B的提取动力学方程，使浸提过程的条件选择更具有科学性.本文所得到的光谱是黄酮类物质的混合光谱，选择荧光总体积积分算法进行计算能够从整体上将黄酮类物质的含量表示出来，避免了其他算法的复杂性.

本文设计不同温度、时间及溶剂倍量3个条件对槐米进行提取，分析了槐米甲醇提取液的三维荧光特性，采用荧光总体积积分算法[11]对不同条件下提取的黄酮类物质进行定量分析，研究浸提过程中黄酮类物质浓度的变化规律，并以中草药浸提的数学模型为基础，对槐米的浸提过程进行动力学研究.

1实验方法

1.1??仪器和试剂

主要仪器有：同步吸收-三维荧光光谱仪（Aqualog-UV-800-C型，HORIBA集团）、电子分析天平（AL104型，上海梅特勒-托利多公司）、智能磁力搅拌器（ZNCL-G190*90型，巩义市予华仪器有限责任公司）.

槐米购于广西玉林中药材市场，产地为广西;芸香叶苷（98%，上海凛恩科技发展有限公司）.

1.2??槐米中黄酮类物质的浸提

在100mL甲醇中加入一定量的槐米，水浴回流，磁力搅拌转速450r/min，在不同条件下进行浸提实验，其中浸提热力学温度为313K、318K、323K、328K、333K，时间为10min、20min、30min、40min、50min、60min，溶剂倍量（溶剂甲醇所需体积与槐米质量之比）為100、125、150、175、200.分别取出少量不同条件下的浸提液，稀释后进行三维荧光检测.

三维荧光检测条件：激发波长300～600nm，积分时间0.5s，步进3nm.检测到原始数据后，得到系列样本三维光谱数据.

1.3??荧光总体积积分法定量分析浸提液

荧光总体积积分法是利用Monte-Carlo积分原理对特征物质峰进行体积积分，进而通过积分值来表示物质荧光强度的方法[12].荧光总体积积分算法相比于其他算法操作更简单，只需对原始数据进行选择处理便可进行计算，保留了数据的原始特点，能更好地体现数据的真实性.荧光总体积积分公式[13]如下：

[?=ExEmI（λExλEm）dλExdλEm]??（1）

式中：[?]为荧光区域的积分体积，au·nm2;[λEx]为激发波长，nm;[λEm]为发射波长，nm;[I（λExλEm）]为激发-发射波长对应的荧光强度，au.

精密称取芦丁对照品粉末0.0300g于烧杯中，甲醇溶解，配制得到质量浓度范围在20～1200μg/mL的对照品溶液.用荧光总体积积分方法计算芦丁对照品中特征峰的体积积分值，以对照品的浓度为横坐标，荧光体积积分值为纵坐标建立标准曲线.

对各浸提液及对照品的三维荧光光谱进行分析，选出样本及对照品中对应黄酮类物质的荧光响应峰，应用式（1），求取各样本和对照品的总体积积分值.

1.4??槐米中黄酮类物质的浸出动力学

储茂泉等[14-15]在假设中草药浸提的速率完全受扩散控制的前提下，根据Fick第一扩散定律推导出了中