高效液相色谱法定性定量分析【共19张PPT】.pptVIP

高效液相色谱法定性定量分析提纲一﹑HPLC系统简介二﹑HPLC中的固定相和流动相三﹑应用范围四﹑定量定性分析一、HPLC系统HPLC系统输液泵进样器色谱柱检测器数据记录及处理HPLC示意图市售的用于HPLC的各种微粒填料好多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等，其粒度一般为3，5，7，10μm等，柱效理论值可达5～16万/米。流动相不含有任何腐蚀性物质；色谱系统优化和专家系统。紫外检测器是液相色谱中使用最广泛的一种检测器。由于每一种化合物在特定的色谱条件下（流动相组成、色谱柱、桂温等相同），其保留值具有特征性，因此可以利用保留值进行定性。检测器是HPLC系统的三大关键部件之一，作用是把洗脱液中的组分的量转化为电信号。对于某些有特殊紫外谱图的化合物，也可以通过对照标准谱图的方法来识别化合物。色谱系统优化和专家系统。泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和固定相的选择：（+++表示好，++表示一般，+表示差）对于某些有特殊紫外谱图的化合物，也可以通过对照标准谱图的方法来识别化合物。流动相不含有任何腐蚀性物质；流动相不含有任何腐蚀性物质；它们涉及石油化工产品、食品、合成药物、生物化工产品及环境污染物等，约占全部有机化合物的80％。对于某些有特殊紫外谱图的化合物，也可以通过对照标准谱图的方法来识别化合物。输液泵：输液泵是HPLC系统中的重要部件之一，泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和分析结果的可靠性。泵应具有的性质：流量稳定；流量范围宽；输出压力高；液缸容积小；密封性能好，耐腐蚀。输液泵操作时的注意事项：防止任何固体微粒进入泵；流动相不含有任何腐蚀性物质；工作时要注意溶剂瓶中的溶剂用完；泵的工作压力不能大于规定的最大压力；流动相要先进行脱气，防止产生气泡。进样器：目前采用较多的是六通进样阀和自动进样器。对进样装置的要求：密封性好，死体积小，重复性好，保证中心进样，进样时对色谱系统的压力、流量影响小。进样方式可分为：隔膜进样、停流进样、阀进样、自动进样。目前应用做多的是阀进样和自动进样。进样器色谱柱色谱柱的要求：柱效高、选择性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各种微粒填料好多孔硅胶以及以硅胶为基质的键合相、氧化铝、有机聚合物微球(包括离子交换树脂)、多孔碳等，其粒度一般为3，5，7，10μm等，柱效理论值可达5～16万/米。对于一般的分析只需5000塔板数的柱效;对于同系物分析，只要500即可;对于较难的分离物质对则可采用高达2万的柱子，因此一般10～30CM左右的柱长就能满足复杂混合物分析的需要。检测器检测器是HPLC系统的三大关键部件之一，作用是把洗脱液中的组分的量转化为电信号。HPLC的检测器要求是灵敏度高，噪音低，线性范围宽，重复性好，适用范围广等特点。传统的方法是在色谱图上某组分的色谱出现极大值即最高浓度时，通过停泵等手段，使组分在检测池中滞留，然后对检测池中的组分进行全波长扫描，得到该组分的紫外—可见光谱图；3．利用紫外检测器全波长扫描功能定性固定相的选择：（+++表示好，++表示一般，+表示差）它是将已知量的参比物（内标物）加到已知量的试样中．那么试样中参比物的浓度为已知；对于某些有特殊紫外谱图的化合物，也可以通过对照标准谱图的方法来识别化合物。输液泵是HPLC系统中的重要部件之一，流动相不含有任何腐蚀性物质；泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和输液泵是HPLC系统中的重要部件之一，流动相不含有任何腐蚀性物质；有机聚合物刚性小、易被压缩，溶剂或溶质容易渗入有机基质中，导致填料颗粒膨胀，结果减少传质，最终使柱效降低。流动相应不改变填料的任何性质；流动相不含有任何腐蚀性物质；对于某些有特殊紫外谱图的化合物，也可以通过对照标准谱图的方法来识别化合物。2．利用检测器的选择性定性数据记录及处理目前对于数据记录及处理所采用的是计算机，计算机的广泛应用使得HPLC操作更加迅速，简便，准确，精密和自动化，现在已经可以在互联网上远程处理数据，目前计算机在HPLC上的用途主要由：采集处理和分析数据；控制仪器；色谱系统优化和专家系统。HPLC的固定相和流动相固定相：即所说的基质或者单体，可以是陶瓷的无机物基质，也可以是有机聚合物基质。无机物基质主要是硅胶和氧化铝，在溶剂中不容易膨胀，有机聚合物基质主要是交联苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯。有机聚合物刚