替加环素药敏试验难点及数据解读.pptx

实验室药敏试验操作的难点要点国内替加环素数据的解读

泛耐药(PDR)菌株在革兰阴性菌中的检出率

(中国CHINET2005-2010)年份肺炎克雷伯菌铜绿假单胞菌鲍曼不动杆菌受试株PDR株%受试株PDR株%受试株PDR株%201085080861.74949105821.0200945568117416370917.0200830781001312034010.920073078100.33988129382006310750.247021443.027341053.82005208020.124731044.2190427914.7泛耐药菌(PDR)在肺炎克雷伯菌和鲍曼不动杆菌的检出率有逐年上升的趋势

不动杆菌属对抗菌药物的耐药率变迁（中国CHINET2005-2010）美罗培南亚胺培南耐药率（%）菌株数209529683157362547965523%（总株数）9.28.78.810.011.011.5%（革兰阴性菌）13.712.913.414.415.516.1%（非发酵菌）30.430.432.736.237.440.2舒普深特治星对亚胺培南、美罗培南的耐药率近60%

2005-2011年鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药率变化

鲍曼不动杆菌的耐药问题已经成为全球性的事件。广泛耐药（XDR）或泛药耐(PDR）的鲍曼不动杆菌可选药物非常少。替加环素粘菌素可联合碳青霉烯类或舒巴坦

Tigecycline替加环素甘氨酰环素结构与四环素药物类似抗菌谱广Gram-positive,Gram-negative,andanaerobicorganisms对铜绿假单胞菌无效适应征复杂的皮肤软组织感染复杂的腹腔内感染社区获得性肺炎

替加环素药敏操作难点检测方法对测定结果的影响药物自身对测定结果的影响培养基对测定结果的影响菌种对测定结果的影响判定折点对测定结果的影响判读结果时的注意事项

测定MIC的常用方法宏量肉汤稀释法微量肉汤稀释法（参考方法）琼脂稀释法Etest法

抗菌药物浓度折点特点：实验耗材消耗大。每次只完成少数菌株。结果判读容易，结果准确。

特点：实验材料消耗少。每次可以完成大量菌株。结果判读容易，结果准确。容易产生污染。

耗材消耗适中。药物消耗较大。一次可以完成多株菌株。判读结果繁琐，需要经过训练，MIC分布较微量肉汤稀释法有右移。

成本较高，不适用于大规模的实验。

纸片扩散法

纸片扩散法的判读和解释孵育16-18小时后测量抑菌圈直径。使用卡尺以厘米为单位测量抑菌圈的直径不要测量抑菌圈模糊的边缘。存放于冰箱之中温度≤8°C。一旦包装打开后，存有药敏纸片的小管要置于密闭的容器之中，避光保存。使用前1-2小时将药敏纸片从冰箱中取出。药敏纸片在保存的过程中颜色发生改变不能继续使用。

阴性菌药敏卡GN13与GN16√含有此种药物╳不含有此种药物氨苄西林/舒巴坦、头孢他啶可由AES推导

药物自身对测定结果的影响理化性质活泼，见光易分解在空气中久置后易被氧化可导致替加环素有效抗菌活性的降低→MIC的升高。

药物配制准确称量药物，若药物用量太少则可以配制高浓度储液。浓度计算需准确，需要考虑到药物的效价溶解药物要按照CLSI的推荐溶剂溶解

若用替加环素临床用药，则将整瓶药粉溶解。如图：50mg若加入10ml溶剂则终浓度为5mg/ml

溶解后的药物尽快使用完溶解后的替加环素为黄色透明液体。立即使用完毕，即使在冰箱内冷冻也不能防止药物的降解（替加环素标准品）。

培养基对替加环素抗菌活性的影响BD培养基：Etest微量肉汤稀释法；Etest法：oxoid的ISO＜BD的MHCohenStuartJ,etal.AAC.2010Jun;54(6):2746-7.

离子浓度不同

培养基存放温度及存放时间不同对替加环素药物活性的影响存放时间过长对肉汤稀释法测定结果影响较大肉汤培养基中氧含量较高，存放时间过长会由于氧化作用而使替加环素失活结论：替加环素需要在实验当天现配制含药肉汤或含药琼脂。

不新鲜培养基的结果差异肉汤稀释法：两次检测圴为了2μg/mlE-tset法（用不新鲜的MH平板检测）：MIC=24μg/ml

菌种对测定结果的影响易受外界因素影响较大的细菌：不动杆菌、粘质沙雷菌、肺炎链球菌和化脓性链球菌。中介范围内的一些小误差主要在肺炎克雷伯菌中出现；在鲍曼不动杆菌，Etest检测的MIC90是肉汤稀释法的4倍；粘质沙雷菌，化脓性链球菌和肺炎链球菌Etest法检测的MIC明显高于肉汤稀释法；粘质沙雷菌Etest检测的MIC50是肉汤稀释法的4倍；有4-5%链球菌Etest检测结果比肉汤稀