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融合基因cryIAC-cmgI构建及原核表达

标题:融合基因cryIAC-cmgI构建及原核表达

摘要:

农业害虫对农作物的破害和传播疾病是全球生态系统中的重要问题。

农业生物技术的发展为绿色、可持续的害虫控制提供了新的策略。本研

究旨在构建一个融合基因cryIAC-cmgI，以改进杀虫效果，并通过原核系

统实现该基因的高效表达。首先将cryIAC和cmgI基因分别从其来源菌

株中扩增，然后通过PCR方法将两段基因连接起来，构建融合基因。接

着通过原核表达质粒的构建和转化到宿主细菌中，运用IPTG诱导表达，

最终获得高表达的cryIAC-cmgI融合基因。

引言:

农业害虫对农作物的病虫害控制具有重要意义。然而，传统的化学

农药存在环境污染、对非靶标生物的危害以及抗药性的问题。因此，开

发高效、低毒和可持续的害虫控制方法尤为重要。农业生物技术在害虫

控制领域展现出巨大潜力。其中，生物农药基因工程研究已经取得了一

定的成果。融合基因是一种常见的基因工程方法，在获得更强杀虫效果

中发挥了重要作用。

方法:

1.cryIAC和cmgI基因扩增：从适用的菌株中提取基因组DNA作为

PCR反应的模板，利用特异性引物扩增cryIAC和cmgI基因。

2.融合基因构建：将cryIAC和cmgI基因通过PCR方法连接起来，

生成融合基因cryIAC-cmgI。连接反应主要通过DNA连接酶和连接酶缓

冲液进行。

3.原核表达质粒构建：将融合基因插入适用的表达质粒载体中。表

达质粒包括启动子、报告基因、选择标记基因等元素，以实现高效表达

和筛选阳性菌落。

4.原核转化和诱导表达：将表达质粒转化到宿主细菌中，通过筛选

获得阳性菌落。将阳性菌落培养至合适生长相，添加IPTG（异丙基-β-D-

硫代半乳糖苷）进行诱导表达。

5.高效表达融合基因的鉴定：通过SDS、Westernblotting等

技术鉴定并分析高表达融合基因的产物。

结果与讨论:

本研究成功构建了融合基因cryIAC-cmgI，并通过原核表达系统实现

了高效表达。经过PCR扩增和连接酶反应，得到了约2.8kb的融合基因。

经验证，融合基因插入到了适用的表达质粒载体中。将质粒转化到大肠

杆菌宿主中，通过抗生素筛选得到阳性菌落。在经过IPTG诱导后，高表

达融合基因的产物得到了明显的表达。

此外，利用SDS和Westernblotting技术对高表达融合基因

的产物进行了鉴定。结果显示，融合基因成功在宿主细菌中表达，并且

产物具有与预期蛋白相符的分子量。这表明cryIAC-cmgI融合基因可以

在原核系统中高效表达，并且有望应用于害虫控制。

总结:

本研究成功构建了融合基因cryIAC-cmgI，并通过原核表达系统实现

了高效表达。融合基因的构建和表达为害虫控制提供了一种新的策略。

进一步的研究将有助于深入理解cryIAC-cmgI融合基因的杀虫机制，并

将其应用于农业生产中，为绿色、可持续的害虫控制做出贡献。