二烯丙基二硫对辐照小鼠血睾屏障的保护效应.docx

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二烯丙基二硫对辐照小鼠血睾屏障的保护效应

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摘要：二烯丙基二硫(Diallyldisulfide，简称DADS)，是一种小分子量的大蒜脂溶性提取物，也是大蒜素的活性成分之一，有清除自由基、提高细胞抗氧化能力之功效。DADS对多种疾病有预防和治疗作用，在放疗方面可能具有辐射保护和辐射增敏等双重效应。而且，大蒜是一种天然植物，毒性小、廉价及使用便利，有利于广泛应用。本文通过实验初步探讨了DADS对辐照小鼠血睾屏障的保护作用，研究DADS对辐照小鼠血睾屏障的保护作用及其机制。

关键词：二烯丙基二硫；辐照损伤；小鼠；保护效应

电磁脉冲(Electromagneticpulse,EMP)是一种高能、超宽频谱电磁波,在民用和军事领域均有广泛的运用,其生物学效应已受到各国学者广泛的关注。睾丸是EMP高度敏感器官之一。既往研究大多侧重于研究DADS对辐照损伤小鼠睾丸生精上皮和间质细胞保护效应，对对血-睾屏障保护效应的研究较少。本研究采用常规苏木精-伊红染色(HE)、硝酸镧示踪电镜,观察辐照损伤小鼠经二烯丙基二硫预处理后其血-睾屏障结构改变情况，分析其在小鼠血-睾屏障中的保护效应,为电磁脉冲辐射对生殖器官的损伤与防治提供理论基础。

1材料和方法

1.1试验动物与分组

8周龄Balb/c雄性小鼠30只,体重(25±1)g,广东省实验动物中心提供（许可证号：SCXK(粤)2013-0002）。随机分为观察组与对照组各15只。观察组小鼠腹腔注射DADS，剂量为20mg/kg，连续注射3天。对照组不予以DADS腹腔注射。在观察组小鼠完成注射后，第二天进行照射，各组小鼠分别在辐射后2,6,12,24和48h随机各取3只进行观察。

1.2照射条件

将两组小鼠分别装入有机玻璃盒内,垂直置于辐射场中,接受场强为400kV/m全身照射,前沿3ns,脉宽340ns,脉冲间隔25s,共计200个电磁脉冲。

1.3实验方法及步骤

1.3.1HE染色与电镜观察

观察组与对照组小鼠分别于辐射后上述五个时间点各取3只,在戊巴比妥钠腹腔注射(40mg/Kg)麻醉下,取双侧睾丸,左侧睾丸固定于Bouin’s液24h,常规脱水石蜡包埋,连续切片(4μm),裱贴于三-氨丙基三乙氧硅烷(3-Minopropyltriethoxysilane,APES)处理过的载波片上,行常规HE染色;右侧睾丸迅速固定于镧醛固定液,随即切为1mm2大小继续固定2h,用含镧的0.1mol/L二甲砷酸钠缓冲液浸洗3次,每次10min,然后用不含镧的10g/L四氧化锇(OsO4)固定2h,经二甲砷酸钠缓冲液浸洗后常规电镜梯度丙酮脱水,Epon-812包埋,LKB-NoVa型超薄切片机切片,用JEM-2000EX型电镜观察。

2结果

2.1HE染色观察

HE染色结果显示,在400kV/m电磁脉冲辐照条件下，经二烯丙基二硫处理的观察组小鼠生精小管内生精上皮排列规则,无明显生精上皮的脱落、坏死现象出现。而在同样辐照条件下的对照组,辐射后2h即可见生精小管管腔内生精细胞变性、少数凋亡、坏死及脱落,以精母细胞居多,基底室内出现细胞缺损,伴精原细胞核浓缩,支持细胞胞核明显缩向基底面,并与生精细胞相分离;辐射后6h,12h和24h,以上现象有加重的趋势;辐射后48h,部分生精小管内出现基底室与近腔室的分离,生精小管基膜不同程度增厚,局部缺损,间质水肿,毛细血管轻度扩张,内皮细胞核浓缩变性,基底膜轻度增厚,显示血-睾屏障结构明显损伤。

2.2电镜观察

在400kV/m电磁脉冲辐照条件下，经二烯丙基二硫处理的观察组的小鼠，各级生精细胞、支持细胞和紧密连接结构清晰,镧颗粒在生精小管沉淀于基膜和基底室内精原细胞与细线前期精母细胞间。而未经过二烯丙基二硫处理的小鼠，在400kV/m电磁脉冲辐照条件下，各级生精细胞不同程度胞核浓缩变性,少数细胞呈现凋亡图象(核染色质浓缩边集,沿核膜呈圆环形或半月形),或坏死,尤以精原细胞和精子细胞为明显,同时,支持细胞紧密连接部分结构裂解破坏,或模糊不清,并见镧颗粒更广泛沉淀于各级生精细胞间,其中辐射后2h即可见到镧颗粒突破支持细胞紧密连接,在近腔室内精母细胞、圆形精子细胞、精子间均可见沉淀;辐射后6h,12h,24h和48h,在生精小管内还可见逐渐增多的凋亡与坏死的生精细胞,以细线前期精母细胞与晚期粗线期精母细胞居多。

3讨论

国内外研究显示,电磁脉冲辐射可对中枢神