哺乳动物细胞表达系统.ppt

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2024-09-14 发布于广西
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哺乳动物细胞表达系统;特点与优势;应用领域;研究现状;一、稳定表达细胞系的筛选;二、哺乳动物细胞表达系统;高等哺乳动物受体细胞;高等哺乳动物细胞的生长特性;高等哺乳动物受体细胞的条件;高等哺乳动物受体细胞的遗传标记;宿主细胞;常用的高等哺乳动物受体细胞;宿主细胞;宿主细胞;对细胞株选择性地进行遗传改造;对细胞株选择性地进行遗传改造;对细胞株选择性地进行遗传改造;真核表达载体;;真核表达载体;真核表达载体-启动子;真核表达载体-启动子;真核表达载体-启动子;真核表达载体-启动子;真核表达载体-启动子;真核表达载体-启动子;真核表达载体-增强子;内含子;真核基因的hnRNA的加工过程需要PolyA信号,在目的基因3’端加上PolyA,表达水平提高10倍以上。

SV40的早期和晚期PolyA.

牛生长激素基因PolyA.

人工合成PolyA.;;;;IRES;;;;分泌表达载体;;;;;可调控的哺乳动物细胞表达系统;四环素〔tet〕调控表达系统;作用机制示意图;;;;;四环素调控表达系统构成元件;四环素转录激活子

〔tetracylinetranscriptionalactivator，tTA〕;四环素调控反式激活子tTA;

=TetR+AD

加DOX

tTA+DOX结合那么tTA不与TRE结合,外源基因不表达.

反之,去DOX,

tTA与TRE结合,外源基因表达.;反式四环素转录激活子;ThereverseTetrepressor(rTetR)wascreatedbyfouraminoacidchangesthatreversetheprotein’sresponsetoDox.Asaresultofthesechanges,therTetRdomainofrtTAbindstheTREandactivatestranscriptioninthepresenceofDox.;;;;;香豆霉素调控表达系统;;;香豆霉素调控表达系统;RapidandEfficientGenerationofIsogenicExpressionCellLinesusingTargetedIntegration;RapidandEfficientGenerationofIsogenicExpressionCellLinesusingTargetedIntegration;;三、展望