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呼吸系统感染21联检检测试剂盒标准操作规程--第1页

s呼吸系统21联检检测试剂盒标准操作规程

１目的

明确呼吸系统21联检检测试剂盒检测的操作规程，指导检验人员正确进行基因芯片检

测。

2适用范围

2.1适用于进行呼吸系统21联检检测试剂盒检测的检验人员。

2.2适合仪器：常规基因扩增仪、恒温杂交箱。

2.3方法原理：采用PCR和DNA杂交相结合的DNA芯片技术。

2.4样品要求：泌尿生殖道样本。

3职责

实验操作人员应严格按操作规程进行实验。

4试剂来源

《呼吸系统21联检检测试剂盒》（昆明寰基生物芯片开发有限公司）。

5质控物

阴性对照来源于试剂盒

6检验方法

6.1仪器和耗材

6.1.1无菌操作台；

6.1.2基因扩增（PCR）仪（适用0.2mlPCR薄壁管）；

6.1.3取样器（0.5-10μl、40-200μl、200-1000μl）；

6.1.4台式离心机（转速可达12,000rpm）；

6.1.5恒温培养箱（可恒温42℃）或可调42℃的保温台

6.1.6水浴恒温振荡器（可恒温25℃）；

6.1.7载玻片架及玻片洗脱容器2个；

6.1.8芯片激光扫描仪(AxonGenePix4000B)；

6.1.9PCR扩增所需一次性耗材。

6.2检测前准备

6.2.1芯片洗脱液配制（若10%SDS出现白色絮状沉淀，请于42℃条件加热至溶液透明后再

使用）

6.2.1.1在芯片洗脱容器中按照蒸馏水（或纯化水）:20×SSC:10%SDS=100:5:1配制洗

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脱液Ⅰ，洗脱液配制总体积应满足浸没芯片；

6.2.1.2在芯片洗脱容器中按照蒸馏水（或纯化水）:20×SSC:10%SDS=400:1:4配制洗

脱液Ⅱ，洗脱液配制总体积应满足浸没芯片；

6.2.1.3洗脱液一次配制可连续使用15天，每个试剂盒中提供的洗脱液在一个月内用完。

6.3样本处理

1.用移液器将20μlProtreinaseK加入一个干净的1.5ml离心管中。

2.向离心管中加入200μl样本，再加入200μlCarrierRNA工作液。盖上管盖，漩涡振荡

15S。

3.在56℃孵育15min，简短离心收集管壁及管盖上的液体。

4.加入250μl无水乙醇，盖上管盖漩涡振荡15S，在室温放置5min。

5.将离心管中的溶液全部转移至RNase-Free吸附柱，盖上管盖，8000rpm(-6000×g)离心1min，

弃废液，将吸附柱放回收集管中。

6.打开盖子，加入500μl溶液RW，静置2min，8000rpm(-6000×g)离心1min，弃废液，将

吸附柱放回收集管。

7.重复此步骤一次。

8.打开吸附柱盖子，加入500μl无水乙醇，8000rpm(-6000×g)离心1min，弃废液，将吸附

柱放回收集管。

9.将吸附柱放回收集管中，12000rpm(-13000×g)离心3min，使吸附膜完全变干，弃废液。

10.将吸附柱放入一个RNase-Free离心管（1.5ml）中，打开吸附柱盖子，向膜中央加入20-150

μlRNase-FreeddHO，盖上盖子，室温放置5min。12000rpm(-13000×g)离心1min