利用纳米颗粒纯化固定化组氨酸标签葡萄糖脱氢酶.pdf

分类号：Q814密级：公开

UDC：606编号：10299Z1815030

JIANGSUUNIVERSITY

专业学位硕士学位论文

ThesisforEngineeringMasterDegree

硕士类别：工程硕士

论文题目：利用纳米颗粒纯化固定化组氨酸标签葡萄糖脱氢酶

学科专业：制药工程

作者姓名：李瑞芳

指导教师：张业旺教授

答辩日期：2021年5月29日

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江苏大学硕士学位论文

摘要

葡萄糖脱氢酶（GDH），是一种四聚体短链脱氢酶，广泛应用于临床血糖检

测，生物燃料电池以及辅因子再生等。由于游离GDH易失活、难与反应液或产

物分离、回收和再利用，故将其进行纯化和固定化的策略可以有效降低成本，增

强酶的稳定性，实现快速分离和重复利用。本文制备了两种含Ni2+磁性纳米颗粒，

并用于组氨酸标签重组GDH的一步纯化和固定化。

第二章采用水热法制备了镍铁氧体（NiFeO）磁性纳米颗粒并用于选择性

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亲和纯化和固定化组氨酸标签GDH。对固定化条件进行了优化，最终得到最高

固定化酶活力回收率和蛋白载量分别为71.39%和38.50μgmg-1载体。固定化酶

的最适温度是45℃，较游离酶降低了5℃。固定化酶的最适pH为9.0。固定化

酶的热稳定性和pH稳定性分别是游离酶的3.86倍和27倍。利用NiFeO纳米

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颗粒固定化GDH催化葡萄糖转化为葡萄糖酸内酯的反应，重复使用10次后，

固定化酶仍保留了65%以上的初始活力。

第三章首先采用共沉淀法合成的FeO纳米粒子，然后利用Stöber策略将二

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氧化硅包覆在FeO纳米核上形成FeO@SiO纳米粒子，之后利用多巴胺将Ni2+

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连接在纳米粒子表面得到FeO@SiO-PDA-Ni2+磁性纳米粒子。利用制得的磁性

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纳米材料一步纯化固定化组氨酸标签GDH。研究了不同温度、固定化时间、pH、

缓冲液浓度和蛋白-载体比率等条件对固定化过程的影响，得到最高的固定化酶

活力回收率和蛋白载量分别为44.27%和26.33μgmg-1载体。固定化能有效提高

酶的稳定性。将FeO@SiO-PDA-Ni2+磁性纳米颗粒固定化GDH用于催化葡萄

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糖转化为葡萄糖酸内酯，结果表明，固定化酶重复使用10