氨基酸菌种筛选方案.pdf

氨基酸菌种筛选步骤

一

.准备出发菌株（预计用时：48h）

1.将活化的原始菌株（冰箱中）转接到新鲜的培养基上。

2.纯化，得到单个菌落。

方案一：稀释平板法。

a.原理

将待测样品制成均匀的系列稀释液，尽量使样品中的

微生物细胞分散开，使成单个细胞存在（否则一个菌落就

不只是代表一个细胞），再取一定稀释度、一定量的稀释

液接种到平板中，使其均匀分布于平板中的培养基内。经

培养后，由单个细胞生长繁殖形成菌落。

b.方法步骤

先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如1∶

10、1∶100、1∶1000、1∶10000…），然后分

别取不同稀释液少许，与已溶化并冷却至45℃左右的琼脂培

养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，

制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出出菌落。

如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散

的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。

随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。

方案二：划线法。

a.原理

划线法是将菌落或液体培养基划线在平板上，第一次划线

是挑去菌落或菌液，滑1条（Z型划线）或3条（三线）线，

烧灼接种环后再划下1条（3条），第二次划线的起始点和第

一次划线上开始；然后依次划线4次或更多。每划线一次就意

味着一次稀释。由接种环以菌操作沾取少许待分离的材料，在

无菌平板表面进行平行划线、扇形划线或其他形式的连续划

线，微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少，并逐步分

散开来，如果划线适宜的话，微生物能一一分散，经培养后，

可在平板表面得到单菌落。

b.方法步骤

用接种环沾取少量菌样，在相应培养基平板中划线分离。

划线完毕后盖上培养皿盖，培养24h。

方案三：涂布稀释法。

a.原理

涂平板是将培养液涂布在固体培养基平板上，使得在平板上长

出不连续的菌落，每个菌落都可以认为是一个培养物，但为避免

可能存在的菌落重叠，一般需要进一步划线分离。

c.方法步骤

1.样品稀释液的制备。准确称取待测样品l0g，放入装有

90ml无菌水并放有小玻璃珠的250ml三角瓶中，用手或置摇

床上振荡20min，使微生物细胞分散，静置20-30s，即成10-1

-1

稀释液；再用1ml无菌吸管，吸取10稀释液lml，移入装有

9ml无菌水的试管中，吹吸3次，让菌液混合均匀，即成10-2

-2

稀释液；再换一支无菌吸管吸取10稀释液1ml，移入装有

9ml无菌水的试管中，也吹吸三次，即成l0-3稀释液；以此类

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推，连续稀释，制成10、10稀释菌液。

2.先将培养基熔化后趁热倒入无菌平板中，待凝固后将无

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菌平板编上10、10、10号码，每一号码设置三个重复，

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用无菌吸管按无菌操作要求吸取10稀释液各1ml放入编号

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10的3个平板中，同法吸取10稀释液各lml放入编号10

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的