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检验医学专业实验IV临床微生物学检验部分要点--第1页

细菌形态学检查

一、不染色标本检查（压滴法)

【操作方法】

1、用接种环取大肠杆菌菌液2-3环，置于洁净载玻片中央。

2、取一张洁净盖玻片从菌液一边缓缓放下，覆盖于菌液上，避免菌液中产生气泡。

3、先用低倍镜找到观察部位，再换高倍镜观察细菌的运动。

【结果观察】

有动力：可看到细菌自一处移至另一处，有明显的方向性位移

无动力：细菌呈现布朗运动，只在原地颤动而无位置的改变

二、革兰染色法

【步骤】：制片、染色、镜检

1、制片

涂片：取洁净载玻片一张，用接种环取生理盐水2环，置于玻片上，接种环灭菌后，取细

菌培养物少许与盐水混匀，并涂成均匀薄膜涂片。如用液体材料，如痰、尿液、脓汁等可直

接涂片，不必加生理盐水。

干燥：涂片最好在室温下自然干燥，必要时可将标本面向上，小心间断地在弱火高处烘干，

但切勿紧靠火焰将涂膜烤枯。

固定：涂片干燥后，将标本片在酒精灯上快速的来回通过三次，共约2s～3s，注意温度不可

太高，以涂片涂膜的反面触及皮肤觉轻微烫觉即可。

固定目的：①杀死细菌；②使菌体与玻片粘附较牢，在染色时不致被染液和水冲掉；③菌体

蛋白变性易着色。

2、染色

结晶紫初染1min→卢戈氏碘液媒染1min→95％酒精脱色30sec～1min→稀释石

炭酸复红复染1min，油镜观察

【原理】：

①革兰阳性细菌细胞壁结构较致密，肽聚糖层厚，脂质含量少，乙醇不易渗入；革兰阴性菌

细胞壁结构较疏松，肽聚糖层少，脂质含量多，乙醇易渗入。

②革兰阳性菌的等电点低，革兰阴性菌的等电点较高，在相同pH条件下，革兰阳性菌所带

负电荷比革兰阴性菌多，与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固不易脱色。

③革兰阳性菌细胞内含有大量核糖核酸镁盐，可与结晶紫和碘牢固的结合成大分子复合物，

不易被乙醇脱色；而革兰阴性菌细胞内含极少量的核糖核酸镁盐，吸附染料量少，形成的复

合物分子也较小，故易被乙醇脱色。

【结果观察】：紫色为阳性，红色为阴性

【影响因素】

①操作因素：涂片太薄或太厚，固定时菌体过分受热，以及脱色时间长短，都会影响染色结

果

②染液因素：所有染液应防止染液蒸发而改变浓度，特别是卢戈碘液久存或受光作用后易失

去媒染作用；涂片积水过多会改变染液浓度，影响染色效果

【意义】：

①鉴定细菌：可将细菌分为革兰阳性菌（紫色）和革兰阴性菌（红色），

②观察致病性：大多数G+菌以外毒素为主要致病物质，而G-菌以内毒素为主要致病物质。

两者的致病机制和临床表现各不相同，

③参考选择抗菌药物：大多数G+菌对青霉素、头孢菌素等敏感；大多数G-菌对氨基苷类

抗生素如链霉素、庆大霉素等敏感。

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【用途】：一般细菌学检查或鉴定

三、细菌的形态及排列方式：

①杆菌

②球菌（包括：葡萄球菌、双球菌、链球菌、四联球菌和八叠球菌）

③螺形菌（菌体仅有一个弯曲呈弧形的螺形菌称为弧菌；菌体有数个弯曲的螺形菌称为螺菌；

菌体细长、弯曲呈弧形的螺形菌称为螺杆菌）

四、细菌特殊结构的观察

芽孢：破伤风杆菌（革兰染色法）

荚膜：肺炎双球菌（革兰染色法）

鞭毛：变形杆菌（革兰染色法观察不到，需用特殊染色法，如镀银染色）

培养基的制备

【分类】

按物理性状分