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实时荧光定量PCR具体实验步骤--第1页

实时荧光定量PCR操作步骤

以下实验步骤仅供参考：

1样品RNA的抽提

①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其完全溶解。

②两相分离每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的氯

仿，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到

3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为

下层的红色酚氯仿相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分

配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂

的60%。

③RNA沉淀将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等

体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分

钟后，于4℃下12000rpm离心10分钟。此时离心前不可见的RNA

沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。

④RNA清洗移去上清液，每1