中华鳖腐皮病的病原菌研究-维罗纳气单胞菌温和生物变种.docx

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中华鳖“腐皮病”的病原菌研究

维罗纳气单胞菌温和生物变种-论文网

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论文摘要：对浙江某养殖场患“腐皮病”的中华鳖进行了病原菌分离，分离到2株细菌（编号为040908-1和040908-2）。经人工感染试验证明，这2株细菌都是引起该病的病原菌。分别采取传统细菌生理生化鉴定方法以及全自动细菌鉴定仪VITEK-32对这2株细菌进行了鉴定，结果均表明菌株040908-1为普通变形菌（Proteusvulgaris），而菌株040908-2为维罗纳气单胞菌温和生物变种[U1](Aeromonasveroniibiovarsobria)。研究了27种药物对这2株细菌的药敏试验，结果显示，妥布霉素、新霉素、奥复欣、先锋必素、庆大霉素、卡那霉素等6种药物对这2株细菌均有良好的抑制作用，氟哌酸、吡哌酸、链霉素、四环素等4种药物仅能有效抑制菌株040908-1的生长，而复方新诺明仅对菌株040908-2有显著的抑制作用。

论文关键词：中华鳖,腐皮病,普通变形菌,维罗纳气单胞菌温和生物变种

中华鳖是浙江省四大水产养殖主导品种之一，据统计，2008年全省养殖鳖产量达到103960吨。随着浙江省中华鳖养殖的快速发展和集约化程度的不断提高，中华鳖发病日趋增多，给养殖业带来巨大的经济损失。“腐皮病”是中华鳖养殖过程中的主要病害之一，[U3]发病范围广，持续时间长，对浙江省中华鳖养殖产业造成了严重的损失。本文对我省中华鳖“腐皮病”的病原进行了初步分离研究。

1材料与方法

1.1材料

病鳖取自浙江德清某养殖场，活力差，四肢、颈部、背甲及裙边均有皮肤溃烂病灶；健康鳖取自浙江萧山某养殖场。

1.2病原菌分离

取症状典型的病鳖，无菌条件下从病鳖肝、肾、脾等组织取样，划线接种于普通营养琼脂培养基上，28C恒温培养24h后，挑取形态特征一致的优势菌落进行克隆培养，共分离到040908-1、040908-2两株细菌，转接斜面保存备用。

1.3人工感染试验

试验采用60cm×50cm×40cm的塑料箱，每箱放养体重50g~80g的健康中华鳖5只，[U4]水温保持25℃左右，连续充气，暂养一天后进行感染试验。试验菌株培养18h~24h后，以无菌生理盐水制成菌悬液，菌悬液含菌量按McF浊度管结合活菌计数方法确定，菌株040908-1为7.5×10cfu/ml，菌株040908-2为1.2×10cfu/ml。以从右后肢注射（0.2ml/只）的方法，将2株菌分别单独或者混合进行人工感染试验。对照组注射等量无菌生理盐水。感染组与对照组均设立两个平行组。

1.4病原菌鉴定

按照常见细菌系统鉴定手册、伯杰细菌鉴定手册（第九版）的方法进行细菌学鉴定。同时采用VITEK32全自动细菌鉴定仪（法国生物梅里埃公司，bioMérieux）的GNI卡进行比较鉴定。

1.5药敏试验

在普通营养琼脂培养基上以纸片法测定病原菌对不同药物的敏感性，经28℃恒温培养24h，观察抑菌圈的有无并用游标卡尺测量其直径，抑菌圈越大，则病原菌对该种药物越敏感。药敏纸片（直径6mm）购自杭州微生物试剂有限公司。同时采用VITEK32全自动细菌鉴定仪（法国生物梅里埃公司，bioMérieux）的药敏试验卡（GNS506）进行MIC测定。

2结果

2.1人工感染试验结果

人工感染试验结果见表1。健康鳖经040908-1、040908-2两菌株人工感染，2d后陆续发病，发病率为100％；4d后病势加重并出现死亡，7d内全部死亡。人工感染的病鳖与自然发病鳖的症状基本一致。从感染死亡鳖分离细菌作鉴定，结果与试验菌株完全相同。试验期间对照组鳖健康活泼，无任何症状。由此证明菌株040908-1、040908-2均为中华鳖“腐皮病”的致病菌。

表1人工感染试验结果

Tab.1Resultsofartificialinfectiontest

菌株

菌液浓度

（CFU/ml）

注射量

（ml/只）

试验数

（只）

累计死亡数

（只）

死亡率

（％）

040908-1

7.5×10

0.2

5

5

100

040908-2

1.2×10

0.2

5

5

100

040908-1/040908-2

7.5×10/1.2×10

0.1+0.1

5

5

100

对照

无菌生理盐水

0.2

5

0

0

2.2病原菌鉴定结果

两株病原菌鉴定结果如表2所示。菌株040908-1杆状，革兰氏阴性，有鞭毛，具有运动性，氧化酶阴性，触酶阴性，生理生化反应与文献所述普通变形菌基本一致。菌株040908-2杆状，革兰氏阴性，氧化酶阳性，生理生化反应与文献所述维罗纳气单胞菌基本一致。

根据全自动细菌鉴定仪VITEK-32的鉴定结果（表3），菌株040908-1的生物编码为6012140120，属于普通变形菌（概率为99％）。菌株04090