土壤中分解尿素的细菌的分离和计数课件.pptVIP

测定土壤中细菌的数量,一般选用104105106

测定放线菌的数量,一般选用103104105

测定真菌的数量,一般选用102103104*问题：为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？原因:土壤中各类微生物的数量（单位:株/kg）是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中:好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。结论:为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。*㈣.取样涂布◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。◆如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板,则说明稀释操作比较成功,并能够进行菌落的计数,如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大,表明试验不精确,需要重新实验。*㈤.微生物的培养与观察在菌落计数时,每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果,以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。培养不同微生物往往需要不同培养温度。细菌:30～37℃培养1～2d放线菌:25～28℃培养5～7d霉菌:25～28℃的温度下培养3～4d。*微生物的培养与观察*之后讲课本P22的最上面内容讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容讲完后讲P23楷体字部分*标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多微生物的分离、计数等半固体培养基加入琼脂较少观察微生物运动、鉴定菌种、保藏菌种等液体培养基不加入琼脂工业生产，连续培养化学组成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确菌种分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生产目的用途鉴别培养基添加某种指示剂或化学药品鉴别不同种类的微生物选择培养基添加（或缺少）某种化学物质培养、分离出特定的微生物培养基：具体配方可以不同，但一般都含有水、碳源、氮源和无机盐。*课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数专题2微生物的培养与应用*一、课题背景1.尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2.细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶CO(NH2)2脲酶+CO2NH3+H2O*3.常见的分解尿素的微生物芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌,某些真菌和放线菌也能分解尿素。4.课题目的①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌*一.研究思路㈠.筛选菌株㈡.统计菌落数目㈢.设置对照*1.实例：启示:寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。原因:因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术,此项技术要求使用耐高温(930C)的DNA聚合酶。㈠.筛选菌株*1.分析该配方的培养基对微生物是否具有筛选作用？如果有，又是如何进行筛选的？有筛选作用。尿素是培养基中的唯一氮源,因此,原则上只有能够利用尿素的微生物才能够生长。答:不一定，有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能够在选择培养基上生长的微生物不一定是所需要的微生物，还需要进一步的验证。2.只要能够在选择培养基上生长的微生物是否就是所需要的微生物？*培养基的氮源为尿素,只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素,以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素,缺乏氮源而不能生长发育繁殖而受到抑制,所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。2.培养基选择分解尿素的微生物的原理选择培养基:在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。*6.怎样证明此培养基具有选择性呢？以尿素为唯一氮源的培养基牛肉膏蛋白胨培养基?是分离尿素细菌判断该培养基有无选择性实验组对照组培养基类型是否接种?目的?结果只生长尿素细菌生长多种微生物是*1.显微镜直接计数：利用血球计数板,在显微镜