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5、肠杆菌检验程序(详细版)——医学检验资料文档--第1页

肠杆菌科

【器材】

一、SS平板培养基：选择性培养基，有促进目的菌生长的物质和鉴别用指示剂.

1、煌绿、胆盐、硫代硫酸钠、枸橼酸钠等能抑制G+菌及大多数大肠生长，胆盐促进伤寒生长。

2、大肠分解乳糖产酸：中性红（6.8红－8.0黄）变红，与胆盐结合合成胆酸，因而形成中心混浊的

深红色菌落，病原菌不分解乳糖，故菌落呈透明微黄色。

3、枸橼酸铁能指示硫化氢产生，硫化铁呈黑色

4、硫代硫酸钠有缓和胆盐对志贺、沙门菌的毒害作用，并中和煌绿、中性红染料的毒性，使大肠红

色鲜明

二、KIA斜面培养基：用酚红作指示剂（6.8黄－8.4红）。上层为固体琼脂斜面，含乳糖。下层为半

固体琼脂，含葡萄糖，含硫酸亚铁。

1、细菌如能发酵乳糖和葡萄糖产酸产气，则斜面及底层均呈黄色，且有气泡。非致病菌（如大肠埃

希菌）一般既可利用乳糖也可利用葡萄糖，但肺克也是如此。

2、如细菌只发酵葡萄糖不发酵乳糖，因葡:乳为1:10，斜面所产生的少量的酸可因接触空气而氧化

挥发，从而使斜面部分保持原来的红色；底层则是在相对缺氧的状态下，所生成的酸不被氧化挥发而

保持黄色。致病菌一般不能利用乳糖，可用于区别致病/非致病菌。

3、如细菌分解蛋白质产生硫化氢，则与硫酸亚铁反应生成硫化亚铁（黑色沉淀物），使培养基变黑。

左：不发酵乳糖，强产硫化氢。中：不发酵乳糖，不产硫化氢。右：发酵乳糖，不产硫化氢

4、接种方法：先穿刺到底，再在斜面划线。

【实验内容】

一、氧化酶试验

原理：见奈瑟菌属部分

操作：取氧化酶纸片，刮去KIA或普通平板或普通平板上的较大菌落，观察纸片颜色的变化，呈蓝

紫色为阳性，不变为阴性（如试剂为盐酸二甲基对苯二胺，阳性者则为红色）。肠杆菌科多为阳性（但

变形杆菌为阴性）。

注意事项：因SS培养基中的化学成分和生化反应复杂，其菌落可使滤纸变为紫红色，故对肠道杆菌

进行触酶和氧化酶试验时，宜从普通平板或KIA斜面上取菌，以保证试验结果正确。

二、动力试验：

原理：有动力的细菌在半固体培养基中沿穿刺线扩散生长。

培养基：半固体培养基

方法：分别穿刺接种大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，37℃孵育16-18h

结果：穿刺线扩散，培养基透明度减低为动力阳性；穿刺线清晰，培养基透明为动力阴性。本试验，

大肠为（+），肺杆为（-）

三、吲哚试验：（靛基质试验）

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原理：有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸生成吲哚，与对二甲基氨基苯甲醛形成红色

化合物。

培养基：蛋白胨水

方法：将大肠埃希菌和伤寒沙门菌分别接种于蛋白胨水培养基中，37℃孵育16-18h

结果：取出后，滴加吲哚试剂2d，混匀，可见培养物上层呈玫瑰红色为+，不变色为-。本试验，大肠

为（+），伤寒为（-）

四、尿素酶试验：

原理：产生尿素酶的细菌能分解尿素，形成氨，使培养基呈碱性，酚红指示剂变成红色。

培养基：尿素培养基

方法：将大肠埃希菌和变形杆菌分别接种于尿素培养基中，37℃孵育16-18h

结果：培养基变红色者为阳性。变黄为阴性。本试验，大肠为（-），变形为（+）

五、甲基红试验：

原理：某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸可进一步分解为甲酸、乙酸等，故培养物pH在4.5

以下，加入甲基红指示剂后呈红色。有些细菌分解葡萄糖产生的酸进一步转化为其它物质，如醇、酮

等，培养基pH在6.2以上，加入甲基红指示剂呈黄色。

培养基：葡萄糖蛋白胨水

方法：分别接