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NGS二代测序培训演讲人：2024-07-09FROMBAIDU

NGS二代测序技术概述NGS实验操作流程与技巧数据质量控制与解读方法论述生物信息学在NGS数据分析中应用实验室安全与法规遵守要求说明实际操作演练与问题解答环节目录CONTENTSFROMBAIDU

01NGS二代测序技术概述FROMBAIDUCHAPTER

NGS技术原理简介高通量测序利用芯片进行测序，可以在数百万个点上同时阅读测序，从而实现高通量测序，使得测序速度和通量大大提升。数据产出与分析测序完成后，会产生大量的数据，需要利用生物信息学方法进行数据分析和解读，包括质量控制、序列比对、变异检测等步骤。边合成边测序通过捕捉新合成的末端的标记来确定DNA的序列，特有的技术体系包括可逆终止子、DNA聚合酶和荧光标记的dNTP。030201

NGS技术起源于上世纪90年代，经历了从第一代到第二代的跨越式发展，测序通量和速度得到了极大的提升。技术起源与早期发展目前市场上主流的NGS测序平台包括Illumina、ThermoFisher等，它们各自具有独特的技术特点和优势。当前主流平台与技术特点随着NGS技术的不断进步，测序成本逐渐降低，同时数据产出和分析也面临着更大的挑战和机遇。技术进步带来的挑战与机遇发展历程及现状

应用领域与市场需求基础科研领域NGS技术在基因组学、转录组学和表观遗传学等基础科研领域有着广泛的应用，为科学家提供了前所未有的研究手段。临床医学领域其他应用领域NGS技术在疾病诊断、精准医疗和药物研发等临床医学领域发挥着越来越重要的作用，为个体化医疗的实现提供了有力支持。此外，NGS技术还在农业育种、生态环境监测、法医鉴定等领域展现出广阔的应用前景。

通过本次培训，使学员全面了解NGS二代测序技术的原理、发展历程、应用领域及市场需求，掌握基本的测序数据分析和解读能力，为今后的科研或临床工作打下基础。培训目标本次培训将围绕NGS技术原理、测序平台与操作流程、数据产出与分析方法、应用领域与前景等方面展开详细讲解，并结合实践操作和案例分析，使学员能够学以致用。内容安排本次培训目标与内容安排

02NGS实验操作流程与技巧FROMBAIDUCHAPTER

质量控制对采集的样本进行质量检测，包括DNA/RNA的浓度、纯度以及完整性等，以确保样本质量符合实验要求。样本采集根据实验需求，采集适当的样本，如血液、组织等，并确保采集过程中避免污染。样本保存与运输采用适当的保存方法，如低温保存，并确保在运输过程中样本的完整性和稳定性。样本准备及质量控制方法

文库构建原理掌握文库构建过程中的关键步骤和操作技巧，以提高文库构建的成功率和质量。文库构建操作技巧质检标准了解文库质检的方法和标准，包括浓度、片段大小分布等，以确保文库质量满足测序要求。了解不同NGS平台的文库构建原理，包括片段化、末端修复、加A尾、连接接头等步骤。文库构建与质检标准介绍

仪器准备检查测序仪的状态，确保其正常运行，并进行必要的维护和保养。试剂准备准备测序所需的试剂，如测序引物、酶等，并确保其质量和浓度符合要求。样本加载按照测序仪的要求，正确加载待测样本，并设置适当的测序参数。注意事项在测序前，应仔细检查所有步骤是否按照要求完成，以避免测序失败或数据质量不佳。上机测序前准备工作及注意事项

数据下机后初步处理流程数据下载与解压从测序仪上下载原始数据，并进行解压操作，以便进行后续分析。数据质量评估对原始数据进行质量评估，包括读取质量、碱基质量等，以确保数据质量可靠。数据过滤与修剪根据质量评估结果，对数据进行过滤和修剪，以去除低质量或不可靠的读取。初步分析对数据进行初步分析，如统计读取数量、GC含量等，以了解数据的整体情况。

03数据质量控制与解读方法论述FROMBAIDUCHAPTER

原始数据质量评估指标讲解碱基质量值（QualityScore）01讲解如何通过碱基质量值评估测序数据的质量，包括Q20、Q30等质量指标的含义和重要性。测序深度（SequencingDepth）02介绍测序深度的概念及其对变异检测准确性的影响，探讨不同测序深度下变异检测的灵敏度和特异性。GC含量（GCContent）03分析GC含量对测序质量的影响，以及如何根据GC含量调整测序策略以提高数据质量。重复序列（DuplicateReads）04解释重复序列产生的原因及其对数据分析的影响，讨论去除重复序列的方法和必要性。

去除低质量序列分享根据质量值、测序接头等信息去除低质量序列的技巧，以提高数据的准确性和可靠性。校正测序错误数据标准化处理数据清洗、过滤和校正技巧分享介绍使用工具对测序错误进行校正的方法，包括基于k-mer的校正、基于统计模型的校正等。讲解数据标准化处理的必要性和方法，以确保不同样本之间的数