基质辅助激光解吸电离飞行时间核酸质谱法体细胞突变检测通则.docxVIP

Q/LB.□XXXXX-XXXX

PAGE2

ICS

11.040.01

CCS

N54

T/CRHAXXX—XXXX

基质辅助激光解吸电离飞行时间核酸质谱法体细胞突变检测通则

Methodofsomaticmutationdetectionformatrix-assistedlaserdesorptionionizationtimeofflightmassspectrometry

（征求意见稿）

XXXX-XX-XX发布

XXXX-XX-XX实施

中国研究型医院学会?发布

团体标准

STYLEREF标准文件_文件编号T/XXXXXXX—XXXX

STYLEREF标准文件_文件编号T/CRHAXXX—XXXX

PAGE2

目次

TOC\o1-1\h前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4缩略语 1

5原理 2

6试剂与耗材 2

7仪器与设备 2

8操作步骤 2

9质量控制 3

10结果分析 3

11结果表述 3

12实验室要求 3

附录A（资料性）PCR反应液配方表及反应程序 4

附录B（资料性）SAP反应混合液配方表及反应程序 5

附录C（资料性）单碱基延伸反应混合液配方表及反应程序 6

参考文献 7

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

注意本文件的某些内容有可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由中国研究型医院学会临床数据与样本资源库专业委员会提出。

本文件由中国研究型医院学会归口。

本文件起草单位：XXX。

本文件主要起草人：XXX。

基质辅助激光解吸电离飞行时间核酸质谱法体细胞突变检测通则

范围

本文件为实验室利用飞行时间核酸质谱平台进行肿瘤个体化用药基因或肿瘤良恶性辅助诊断基因的体细胞突变检测提供技术指导。

本文件适用的样本类型包括新鲜肿瘤组织、肿瘤组织或者细胞石蜡包埋切片。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

T/ZZB2482-2021飞行时间核酸质谱仪

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

引物（Primer）

结合于模板链上，引导聚合酶进行延伸的起始位点或终止位点的，具有一定长度和顺序的寡核苷酸。

聚合酶链式反应（PolymeraseChainCeaction）

聚合酶链反应或多聚酶链反应是一种在体外对模板DNA或RNA的特定片段进行快速扩增的方法，包含变性退火延伸三个基本反应步骤。

单碱基延伸（SingleBaseExtension）

适宜的反应体系中，在延伸引物引导下，聚合酶以ddNTP或者acyNTP为底物仅延伸单个碱基，常用于DNAsequencing和SNP检测。

体细胞突变（SomaticMutation）

体细胞突变是相对于胚系突变而言的，发生在体细胞中的突变，即在体细胞发生了基因突变或染色体畸变，突变性状一般不能传给下一代个体，却可以引起当代某些细胞的遗传结构发生改变的突变。此文的体细胞突变指单碱基突变。

缩略语

下列缩略语适用于本文件。

DNA：脱氧核糖核酸（deoxyribonucleicacid）

PCR：聚合酶链式反应（polymerasechainreaction）

SAP：虾碱性磷酸酶（shrimpalkalinephosphatase）

dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（deoxy-ribonucleosidetriphosphate）

dUTP：脱氧尿苷三磷酸（2-deoxyuridine5-triphosphate）

ddATP：2,3–二脱氧腺苷5-三磷酸（2,3-Dideoxy-adenosine-5-triphosphate）

ddGTP：2,3-二脱氧鸟苷5-三磷酸（2,3-Dideoxy-guanosine-5-triphosphate）

ddCTP：2,3-二脱氧胞苷5-三磷酸（2,3-Dideoxy-cytidine-5-triphosphate）

ddTTP：2,3-二脱氧胸苷5-三磷酸（2,3-Dideoxy-thymidine-5-triphosphate）

UDG：尿嘧啶DNA糖基酶（Uracil-DNAGlycosylase）

原理

提取纯化获得DNA模板，