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纸片扩散法药敏试验

一、原理

纸片扩散法是将含有定量抗菌药物的滤纸片贴在已接种了测试

菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加，

抗菌药物的浓度呈对数减少，从而在纸片的周围形成一种浓度梯度。

在药物扩散的同时，纸片周围抑菌浓度范围内的测试菌不能生长，而

抑菌浓度范围外的菌株则继续生长，从而在纸片的周围形成透明的抑

菌圈。不同抗菌药物抑菌圈的直径因受药物在琼脂中的扩散速率的影

响而可能不同，抑菌圈的大小可反映测试菌对测定药物的敏感程度，

并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关，即抑菌圈越大，

MIC越小。

二、进行药敏实验指征

为保证治疗效果，对引起感染的任何病原菌，若不能从该菌的种

属特征可靠地推知其对抗菌药物的敏感性，就需要进行药敏试验。尤

其当病原菌属于对常用抗菌药物能产生耐药时，就更需进行药敏试验。

若感染是公认的对某一高效抗菌药物敏感的微生物引起的，就很

少需要进行药敏试验了。

三、标本要求

参加药敏试验的菌株包括从临床标本中分离的常见的、快生长的

菌株，如肠杆菌科菌、葡萄球菌、肠球菌、非发酵糖菌；还包括某些

苛养的病原菌，如流感嗜血杆菌、肺炎链球菌及其他链球菌、淋病奈

瑟菌等。标本内的正常菌群，通常不作药敏。

对每一种可能致病的细菌进行敏感试验时，使用的单个菌落都应

选自原始的琼脂平板，鉴定种属的过程常与此同时进行。不同菌种的

混合物不能在同一药敏平皿上进行试验。除非在临床急症患者的标本

（如阳性血培养物）经涂片革兰染色提示单一的病原菌，一般应避免

直接用临床标本（如无菌体液和尿液）做药敏试验。若用临床标本作

了直接药敏试验，也必须按标准方法重复第二次药敏。

四、选药原则

详见临床实验室标准化研究所（CLSI）对各种非苛养菌和苛养菌

进行常规药敏试验和报告时的选药指南表。表中的抗菌药物可满足绝

大多数临床实验室的常规需要，在此表中各种抗菌药物针对具体的菌

种或菌群被分成许多纵列，每一列又根据不同的选择要求分成A、B、

C、U等不同的组，其中A组药物用于常规和首选试验，其结果也应

常规报告。B组包含一些临床上重要、特别针对医院感染的抗菌药物，

可用于首选试验，但只是选择性地报告临床。例如当细菌对A组同类

药物耐药时，可选择性报告B组中的一些结果。B组其他报告指征包

括以下几点：特定的标本来源（如三代头孢菌素对脑脊液中的肠杆菌

科菌，或者磺胺甲唑/甲氧苄啶对泌尿道的分离菌株）；多种细菌感

染；多部位感染；对A组药过敏、耐受或无效的病例；以流行病学调

查为目的向感染控制部门报告。C组包括替代性或补充性抗菌药物，

可在以下情况进行试验：某些单位潜在有局部或广泛流行的对数种基

本药物（特别是同类的，如β-内酰胺类或氨基糖苷类）耐药的菌株；

治疗对基本药物过敏的患者；治疗少见菌的感染（如氯霉素对肠道外

分离的沙门菌属或耐万古霉素的肠球菌）；以流行病学调查为目的向

感染控制部门报告。U组包含某些仅用于治疗泌尿道感染的抗菌药物

（如呋喃妥因和某些喹诺酮类药物），这些药物对除泌尿道以外的感

染部位分离的病原菌不应常规报告，其他具有较广治疗指征的药物也

可包括于U组，其主要针对一些特定的泌尿道致病菌（如铜绿假单胞

菌）。表中的小框中是一些类似的药物，同一框内的药物的结果解释

和临床效力都很相似，因此不必重复试验，而“或”字表示一组相关

的药物，其抗菌谱和结果解释几乎完全相同，所以通常在每个小框中

只选择一种抗菌药物进行试验。

五、仪器

普通孵箱，纸片接种器（英国Oxoid公司或美国BD公司的BBL

产品），镊子，5%CO2孵箱，细菌比浊仪（美国BBL产品）或0.5麦

氏标准比浊管。

六、试剂

1.Mueller-Hinton琼脂（MHA），嗜血杆菌敏感试验用琼脂（HTM），

含5%羊血的MHA。

2.各种临床常用的含有特定量抗菌药物的干燥纸片，纸片中抗菌

药物含量参照CLSI的规定。

七、操作步骤

从孵育了18～24小时的非选择性培养基（如血琼脂）平板上，

挑取单个菌落，直接用肉汤或盐水制成菌悬液作为接种物，将浊度调

整至0.5麦氏标准。此法称之为直接菌落悬液法，是检测苛养菌，如

嗜