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篇一：《培养基的制备与消毒灭菌》实验报告

《培养基的制备与消毒灭菌》实验报告

实验目的

1.学习和掌握配制培养基（以牛肉膏蛋白胨培养基的配制为例）的一般方法

和原理。

2.了解消毒和灭菌的原理，掌握常用灭菌方法的操作步骤。

实验原理

培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以

培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。在自然界中．微生物种类

繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。但

是，不同种类的培养基中，一般应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐、生长

因素等。不同微生物对PH要求不一样．雷菌和酵母的培养基的pH一般是偏酸性

的，而细菌和放线菌的培养基的pH一般为中性或微碱性的(嗜碱细菌和嗜酸细菌

例外)。所以配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将培养基的pH调到合适

的范围。此外，由于配制培养的各类营养物质和容器等含有各种微生物，因此，

已配制好的培养基必须立即灭菌．如果来不及灭菌，应暂存冰箱内，以防止其中

的微生物生长繁殖而消耗养分和改变培养的酸碱度所带来不利的影响。

高压蒸气灭菌是将持灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，

使灭菌锅套间的水沸腾而产生蒸气。待水蒸气急剧地将锅内的冷空气从排气阀中

驱尽，然后关闭排气阀．继续加热，此时由于蒸气不能道出，而增加了灭菌器内

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的压力，从而使沸点增高，得到高于的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而

达到灭菌的目的。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又

称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细菌生长繁殖所需要的最基本的营

养物质，所以可供作微生物生长繁殖之用。基础培养基含有牛肉膏、蛋白胨和

NaCl。其中牛肉膏为微生物提供碳源、能源、磷酸盐和维生素，蛋白胨主要提供

氮源和维生素，而NaCl提供无机盐。在配制固体培养基时还要加入一定量琼脂

作凝固剂，琼脂在常用浓度下96℃时溶化，实际应用时，一般在沸水浴中或下

而垫以石棉网煮沸溶化，以免琼脂烧焦。琼脂在40℃时凝固，通常不被微生物

分解利用。固体培养基中琼脂的含量根据琼脂的质量和气温的不同而有所不同。

由于这种培养基多用于培养细菌，因此要用稀酸或稀碱将其PH调至中性或

微碱性，以利于细菌的生长繁殖。

牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下：

牛肉膏3.0g

蛋白胨10.0g

NaCl5.0g

水1000ml

pH7.4—7.6

实验仪器与药品

1.溶液或试剂：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol／LNaOH、1mol／LHCl。

2.仪器或其他用具：试管、三角瓶、1000ml烧杯（或1000ml刻度搪瓷杯）、

量筒、玻棒、培养基分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH试纸（pH5.5-9.0）、

普通棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布等。

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实验步骤

（一）牛肉膏蛋白胨培养基的制备

1.称量（假定配制1000ml培养基）

按培养基配方比例依