- 1、本文档共11页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档,如果想要下载,成为VIP会员后,下载免费。
- 6、成为VIP后,下载本文档将扣除1次下载权益。下载后,不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后,您将拥有八大权益,权益包括:VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传,每下载1次, 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等,对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
激光扫描共聚焦荧光显微镜的成像原理和基本结构显微镜操作规程--第1页
激光扫描共聚焦荧光显微镜的成像原理和基
本结构显微镜操作规程
(激光扫描共聚焦荧光显微镜)是一种利用计算机、激光和图
像处理技术获得生物样品三维数据、先进的分子细胞生物学的分析
仪器。紧要用于察看活细胞结构及特定分子、离子的生物学变化,
定量分析,以及实时定量测定等。
成像原理
接受点光源照射标本,在焦平面上形成一个轮廓分明的小的光
点,该点被照射后发出的荧光被物镜收集,并沿原照射光路回送到
由双向色镜构成的分光器。分光器将荧光直接送到探测器。光源和
第1页共11页
激光扫描共聚焦荧光显微镜的成像原理和基本结构显微镜操作规程--第1页
激光扫描共聚焦荧光显微镜的成像原理和基本结构显微镜操作规程--第2页
探测器前方都各有一个针孔,分别称为照明针孔和探测针孔。两者
的几何尺寸一致,约100—200nm;相对于焦平面上的光点,两者是
共轭的,即光点通过一系列的透镜,终可同时聚焦于照明针孔和探
测针孔。这样,来自焦平面的光,可以会聚在探测孔范围之内,而
来自焦平面上方或下方的散射光都被挡在探测孔之外而不能成像。
以激光逐点扫描样品,探测针孔后的光电倍增管也逐点获得对应光
点的共聚焦图像,转为数字信号传输至计算机,终在屏幕上聚合成
清楚的整个焦平面的共聚焦图像。
每一幅焦平面图像实际上是标本的光学横切面,这个光学横切
面总是有确定厚度的,又称为光学薄片。由于焦点处的光强宏大于
非焦点处的光强,而且非焦平面光被针孔滤去,因此共聚焦系统的
景深貌似为零,沿Z轴方向的扫描可以实现光学断层扫描,形成待
察看样品聚焦光斑处二维的光学切片。把X—Y平面(焦平面)扫描
与Z轴(光轴)扫描相结合,通过累加连续层次的二维图像,经过
专门的计算机软件处理,可以获得样品的三维图像。即检测针孔和
光源针孔始终聚焦于同一点,使聚焦平面以外被激发的荧光不能进
入检测针孔。
第2页共11页
激光扫描共聚焦荧光显微镜的成像原理和基本结构显微镜操作规程--第2页
激光扫描共聚焦荧光显微镜的成像原理和基本结构显微镜操作规程--第3页
激光共聚焦的工作原理简单表达就是它接受激光为光源,在传
统荧光显微镜成像的基础上,附加了激光扫描装置和共轭聚焦装置,
通过计算机掌控来进行数字化图像采集和处理的系统。
基本结构
(激光扫描共聚焦显微镜系统)紧要包括扫描模块、激光光源、
荧光显微镜、数字信号处理器、计算机以及图像输出设备等。
(1)扫描模块
第3页共11页
激光扫描共聚焦荧光显微镜的成像原理和基本结构显微镜操作规程--第3页
激光扫描共聚焦荧光显微镜的成像原理和基本结构显微镜操作规程--第4页
扫描模块紧要由针孔光栏(掌控光学切片的厚度)、分光镜
(按波长更改光线传播方向)、发射荧光分色器(选择确定波长范
围的光进行检测)、检测器(光电倍增管)构成。荧光样品中的混
合荧光进入扫描器,经过检测针孔光栏、分光镜和分色器选择后,
被分成各单色荧光,分别在不同的荧光通道进行检测并形成相应的
共焦图象,同时在计算机屏幕上可以显示几个并列的单色荧光图象
及其合成图象。
(2)荧光显微镜系统
显微镜是LSCM的紧要组件,它关系到系统的成像质量。显微镜
光路以无限远光学系统可便利地在其中插入光学选件而不影响
文档评论(0)