第 章仪器分析法应用 液相色谱法在化妆品分析中的应用.ppt

“”“”第8章：仪器分析法应用液相色谱法在化妆品分析中的应用二、HPLC技术采用高压输液泵，高效微粒固定相和高灵敏度检测器。三、HPLC特点高压、高速、高效、高灵敏度、样品回收方便。高效液相色谱仪的操作步骤经典LC与HPLC比较?经典LCHPLC柱之内径1~5cm~0.4cm长度50~100cm15~50cm填充材料粒度150μm~200μm4μm~10μm使用压力1~10atm50~200atm分离时间0.5h~天~10min（二）与气相色谱法比较，HPLC的优点1.分析对象广气相色谱只限于分析气体和沸点较低的化合物；HPLC不受样品挥发性和热稳定性的限制，适用于高沸点、热稳定性差、摩尔质量大的物质。原则上讲，几乎可以分析除永久气体外所有的有机和无机化合物。⒉流动相对分离起作用气相色谱的流动相仅起运载作用，对组分不产生相互作用力；HPLC的流动相对组分产生相互作用力，相当于增加了一个控制和改进分离条件的参数。⒊经常在室温条件下操作气相色谱法一般在较高温度下进行缺点：仪器设备费用昂贵，操作严格。固定相和流动相填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相（固体或液体）称为；自上而下运动的一相（一般是气体或液体）称为；装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）称为。当流动相中样品混合物经过固定相时，就会与固定相发生作用，由于各组分在性质和结构上的差异，与固定相相互作用的类型、强弱也有差异，因此在同一推动力的作用下，不同组分在固定相滞留时间长短不同，从而按先后不同的次序从固定相中流出。*固定相流动相色谱柱液液分配色谱1．分离原理液液分配色谱的分离原理基本与液液萃取相同，都是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。所不同的是液液色谱的分配是在柱中进行的，使这种分配平衡可反复多次进行，造成各组分的差速迁移，提高了分离效率，从而能分离各种复杂组分。

2.固定相液液色谱的固定相由载体和固定液组成。常用的载体有下列几类：（1）全多孔型载体：由硅胶、硅藻土等材料制成，直径约100?m的全多孔型颗粒。这类固定相由于颗粒很细，孔仍然较浅，传质速率快，易实现高效、高速。特别适合复杂混合物分离及痕量分析。（2）表面多孔型载体（薄壳型微珠载体）：由直径为30~40?m的实心玻璃球和厚度约为1~2?m的多孔性外层所组成。目前，这种载体粒度为5~10?m。这类固定相的多孔层厚度小、孔浅，相对死体积小，出峰迅速、柱效亦高；颗粒较大，渗透性好，装柱容易，梯度淋洗时能迅速达平衡，较适合做常规分析。由于多孔层厚度薄，最大允许量受限制。（3）化学键合固定相：它是将各种不同有机基团通过化学反应键合到载体表面的一种方法。它代替了固定液的机械涂渍，因此它的产生对液相色谱法迅速发展起着重大作用，可以认为它的出现是液相色谱法的一个重大突破。它是目前应用最广泛的一种固定相。据统计，约有3/4以上的分离问题是在化学键合固定相上进行的。流动相根据所使用的流动相和固定相的极性程度，将其分为正相分配色谱和反相分配色谱。正相分配色谱：流动相的极性小于固定相的极性，它适用于极性化合物的分离。其流出顺序是极性小的先流出，极性大的后流出。反相分配色谱：流动相的极性大于固定相的极性，它适用于非极性化合物的分离，其流出顺序与正相色谱恰好相反液-固吸附色谱的固定相液-固吸附色谱所用固定相多是一些吸附活性强弱不等的吸附剂，如硅胶、氧化铝、聚酸胶等。由于硅胶的优点较多，如线性容量较高，机械性能好，不溶胀，与大多数试样不发生化学反应等，因此，以硅胶用得最多。目前最广泛使用的还是5～10?m的全多孔型微粒填料。盐离子的浓度影响：如果增加盐离子的浓度，则可降低样品离子的竞争吸附能力，从而降低其在固定相上的保留