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细胞DNA定量分析,实现宫颈癌筛查的自动化、智能化及标
准化
在发展中国家以及经济欠发达等卫生资源缺乏的地区,宫颈癌的
发病率与死亡率虽有所减低,但仍远比发达国家高。在这些国家和地
区,普遍存在着人口基数大、卫生资源短缺、病理医生缺乏,尤其是
细胞病理学医生严重不足,加上经济基础和经费实力不够的情况,无
疑放大了宫颈癌三阶梯筛查中第一阶梯细胞学筛查业已存在的问题:
1.不少地区无奈仍沿用60年代制定的宫颈涂片巴氏染色;
2.TCT/LCT检测结果假阴性率较高,容易漏诊早期宫颈癌;
3.高倍镜下寻找细胞的重复性不好,且二次制片时,标本的细胞
量渐减;
4.AS-CUS和AGS性质未定者,需随诊而易失访;
5.细胞病理学诊断医生奇缺,工作多由组织病理医师代替,甚至
不少医院由体弱多病的妇产科医师、护士或检验员弥补来完成工作量;
6.缺乏常态化学习TBS分类法系统的培训机构,细胞病理检验师
没有考核准入制;
7.检测机构缺乏定期质控及审核检查机制。
有癌变趋势或者已经癌变的细胞核酸会异常增生(含量增加),
核酸改变会远早于细胞形态改变。因此,定量分析细胞里面DNA核酸
是否改变和改变多少可以直接、简单、准确判断细胞是否癌变等原理。
正是鉴于此,才有了一种全新的寻找肿瘤细胞的方法——细胞DNA
定量分析。
细胞DNA定量分析技术
细胞DNA定量分析技术主要通过对细胞核内DNA含量或倍体的
测定来判断细胞的生理状态和病理改变,目前主要是使用全自动DNA
图像分析系统(DNA-ICM)。对细胞DNA进行定量分析时,具有如
下特点:
1.检测细胞核内的相对DNA含量。23对染色体约为7.18pg,但
细胞DNA定量分析技术是检测细胞核内的相对DNA含量,而不是绝
对值。在细胞DNA定量分析中,常用c(content)作为单位来衡量
DNA的含量。1个c为正常G0/G1细胞DNA含量的一半,故G0/G1
细胞为2c细胞(2倍体细胞),而G2/细胞为4c细胞(4倍体细胞)。
2.Feulgen染色使DNA特异性着色。Feulgen染色由Feulgen和
Rossenbeck在1924年发现的一种细胞核内DNA染色技术。染色原
理是Schiff试剂(品红醛试剂,由碱性品红和亚硫酸钠配制而成)可
以和酸化水解后DNA上的醛基相结合而显色。其染色的深浅与DNA
的含量成正比。
3.通过测量光密度(灰阶)计算被测细胞细胞核的积分光密度值
(IOD,integratedopticaldensity)。当被测细胞处于G0/G1期时,其
IOD量与正常细胞IOD平均值很接近。
4.用DNA指数来表示DNA含量。DNA指数=IOD值(被测细
胞DNA)/IOD平均值(正常细胞DNA)。由于DNA含量是对二维
结构测定的,它不完全反映染色体的倍数,故用DNA指数来表示
DNA含量。当被测细胞处于G0/G1期时,其IOD量与正常细胞IOD
平均值很接近,故DNA指数为1,即为2c。同理,处于S期的细胞,
DNA指数在1~2之间,即2c~4c之间。
5.同一标本的淋巴细胞作为标准对照。由于淋巴细胞内DNA含量
及形态较为稳定,很多DNA定量细胞学测定淋巴细胞的IOD,将淋巴
细胞DNA作为正常细胞DNA的参照来比较被测细胞的DNA。
6.
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