isct_间充质干细胞_鉴定标准_理论说明.pdfVIP

isct间充质干细胞鉴定标准理论说明

1.引言

1.1概述

在细胞治疗和再生医学领域，间充质干细胞（ISCT）作为一种重要的细胞资源，

引起了广泛的关注。ISCT具有多向分化潜能、免疫调节作用及促进组织修复的

能力，被认为是一种理想的干细胞来源。然而，由于缺乏统一和规范的鉴定标准，

在实践应用中存在着不确定性和挑战。

1.2文章结构

本文将对ISCT进行深入探讨，并重点介绍其鉴定标准的理论说明。文章包括以

下几个部分：引言、ISCT间充质干细胞、鉴定标准理论说明、实践应用与挑战

以及结论与展望。

1.3目的

本文旨在系统梳理当前关于ISCT鉴定标准的理论知识，并探讨该领域面临的实

践应用和挑战。通过对ISCT表面标记物使用、功能性特征评估方法以及分子生

物学检测手段应用等方面原理的介绍，希望能够提供给读者一个全面的理论基础，

并展望ISCT鉴定标准未来的发展方向。同时，对于临床转化前景展望、存在的

问题与挑战以及解决方案和研究进展等方面也将进行讨论。

以上是本文“1.引言”部分的详细内容。该部分概述了文章的主题和目的，并

介绍了本文的结构。接下来将继续展开描述ISCT间充质干细胞及其鉴定标准相

关内容。

2.ISCT间充质干细胞

2.1定义与特征

ISCT（国际干细胞治疗学会）定义了间充质干细胞（MSCs）作为一类多潜能的

成体干细胞，具有自我更新和多向分化的能力。这些细胞可以从不同来源获得，

包括骨髓、脐带血、脂肪组织等。ISCT认为，MSCs应满足以下三个基本标准：

1)在培养条件下，MSCs应具备黏附能力；2)MSCs应表达特定的表面标记物，

如CD73、CD90和CD105，并且在同时应该缺乏（或仅有极低水平）CD34、

CD45、HLA-DR等造血和免疫相关标记物；3)MSCs应能够分化为成骨细胞、

软骨细胞和脂肪细胞等不同种类的细胞。

此外，ISCT提出了额外的功能性特点来进一步确认MSCs。这些功能性特点包

括：1)免疫调节作用：MSCs可以抑制免疫反应，并通过调节T淋巴细胞、B

淋巴细胞和自然杀伤细胞等免疫细胞的功能来达到免疫调节作用；2)细胞迁移

能力：MSCs具有从注射部位向受损组织迁移的能力；3)分泌多种生物活性分

子：MSCs可以产生多种生长因子、细胞因子和表观遗传调控因子，对损伤修复

和组织再生具有重要作用。

2.2基本鉴定标准

ISCT提出了一套基本的鉴定标准，以确保所识别的细胞符合MSCs的定义。这

些标准主要包括表面标记物的检测和功能性特征的评估。

在表面标记物方面，MSCs应该呈阳性表达CD73、CD90和CD105，并且应该

呈阴性或仅偶尔呈弱阳性表达CD34、CD45、HLA-DR等造血和免疫相关标记

物。这些表面标记物的检测通常通过流式细胞术进行。

对于功能性特征的评估，主要有以下几个方面：1)免疫调节功能评价：通过体

外混合淋巴细胞反应、抑制T淋巴细胞的增殖或促进免疫细胞产生特定因子等方

法来评估MSCs的免疫调节能力；2)分化潜能检测：通过诱导MSCs分化为成

骨细胞、软骨细胞和脂肪细胞等多种细胞类型，并通过特定染色法进行鉴定；3)

生物活性分子分泌检测：通过ELISA、PCR等方法，检测MSCs产生的生长因

子、细胞因子和表观遗传调控因子等关键分子。

2.3分离与培养方法

MSCs的分离和培养是获得足够数量和高质量的MSCs用于进一步研究和应用

的关键步骤。目前常用的方法包括原代培养、贴壁培养和筛选标记物阳性细胞。

具体操作流程如下：

首先，从合适数量的组织样本中分离出单个核细胞，经过红细胞溶解后得到核黏

附的间充质细胞。接下来，将这些间充质细胞进行原代培养，通常采用α-MEM、

DMEM/F12或MEMα等基础培养基，并加入适量的胎牛血清或人型干细胞培养

基（serum-free）。

在原代培养后，移除非MSCs细胞，将黏附的间充质细胞继续进行贴壁培养。