【消化】细胞培养的成功因素——细胞消化篇.pdfVIP

【消化】细胞培养的成功因素——细胞消化篇--第1页

【消化】细胞培养的成功因素——细胞消化篇

因为一些特殊的原因，我自己培养接触过近300种细胞，常用于

做实验的，累积有百余种，可以说遇到过各式各样古怪的细胞。这里

挑细胞消化做一篇专题，并不是因为细胞消化最重要，而是近期看到

大家频繁讨论这个话题，我就抛砖引玉，下面几点拙见，可能与其它

朋友总结的一些经验有点出入，仅供大家参考。

细胞消化的一般程序步骤，细节操作，我这里就不讲了，只讲一

些基本操作背后的知识，如有不妥之处，欢迎指正，一起讨论：

1.绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可。吸去胰

酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37℃

一般不到2min足够消化细胞（绝大部分1min不到）。对于这些细胞

原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单

的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37℃消化。

2.什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个

圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多

半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成

完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基

质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经

【消化】细胞培养的成功因素——细胞消化篇--第1页

【消化】细胞培养的成功因素——细胞消化篇--第2页

独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消

化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。

细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这

个是贴壁培养的细胞，尤其是肿瘤细胞的一个特性，无论死活的细胞

都是如此，你可以尝试，准备100%的单个细胞悬液，贴壁后观察细

胞，仍然是几个几个细胞聚集在一起。一些悬浮培养细胞也是如此，

容易聚集，不要去尝试过几个小时就拿出来吹打成单细胞悬液（不要

笑，这个是初养悬浮细胞的人常犯的错误，以为悬浮培养就是一个一

个分开）。细胞只要能从基质上脱离下来，这个时候即使是成片的

（比如Calu-3细胞），吹打不超过20次后（一般10次即可），成小

规模聚集（10个细胞左右），是正常的，不要试图再去延长消化时间，

或者象有的同学那样吹打1h，等待单细胞悬液出现。

3.另一个帖子里提到一个比较复杂的四步消化法，这个挺有意思，

我也是第一次听说，应该是网友自己发展出来的方法，很有参考价值。

但我估计这个方法可能对付少数非常怪异的细胞才需要这么复杂的程

序。我目前养过的近300株细胞里面，还没遇到这么怪异的。比如

Caco2其实是很好消化的细胞，不需要胰酶孵育即可，只是有点成片

分布。不要以为成片分布是自己没养好，这个视细胞而定。如果和标

准形态不一致，那可能是自己没消化好导致的，但如果消化方法正确，

仍然成片分布，甚至完全吹打成单细胞悬液，贴壁后仍然成片分布，

这是细胞的特性，是因为贴壁过程中重新聚集了。这个时候你拼了命

要去让它均匀分布，你的细胞之后会对你越来越不好。

4.比较难消化的细胞（润洗方法5min还不能消化），就以

coloncancer为例，比如HCT15,LS411和KM12，这样的细胞一般需

要用少量胰酶孵育，但也不需要很多，一般100mmdish，一次最多

加入500ul，就足够了，一般我加300ul。即使这样难消化的细胞，一

般不超过5min，即可见细胞成片移动，就应该停止消化。一些