DB34T 2997-2017 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程.docxVIP

ICS11.220B41

DB34

安徽省地方标准DB34/T2997—2017

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程

ProtocolofexaminationforActinobacilluspleuropneumoniae

2017-12-30发布2018-01-30实施

安徽省质量技术监督局发布

I

DB34/T2997—2017

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

本标准由安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司提出。本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽农业大学、安徽浩翔农牧有限公司、安徽杜洛克种猪育种有限责任公司、颍上庆丰农牧发展有限公司。

本标准主要起草人：孙裴、李郁、高亚飞、黄晓慧、崔文竹、魏建忠、殷宗俊、赵顾、张晓东、王希春。

1

DB34/T2997—2017

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作规程

1范围

本标准规定了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的检验的设备和材料、检验程序、操作步骤、与副猪嗜血杆菌鉴别、结果报告。

本标准适用于猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的检验。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.28食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求

GB14922.2实验动物微生物学等级及监测NY/T537猪放线杆菌胸膜肺炎诊断技术

SN/T1447猪传染性胸膜肺炎检疫技术规范

3主要设备和材料

3.1显微镜：物镜10倍～100倍。3.2电子天平：感量0.1g。

3.3恒温培养箱

3.4冰箱：2℃~5℃,-20℃。3.5无菌培养皿：直径90mm。3.6无菌试管：15mm×150mm。

3.7无菌锥形瓶：容量250mL，500mL。3.8pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.9鸡表皮葡萄球菌、金黄色葡萄球菌。

3.10灭菌棉拭子。

3.11革兰氏染色液：按照GB4789.28的规定执行。

3.12鲜血平板培养基：制备方法见附录A中A.1。

3.13营养琼脂培养基：按照GB4789.28的规定执行。

3.14尿素琼脂培养基：按照GB4789.28的规定执行。

3.15改良TSB肉汤培养基：制备方法见附录A中A.2。

3.16改良TSA培养基：制备方法见附录A中A.3。

3.17巧克力琼脂培养基(CA)：制备方法见附录A中A.4。

3.18改良PPLO琼脂培养基(mPPLO)：制备方法见附录A中A.5。

3.19糖发酵培养基：按照GB4789.28的规定执行。

3.20ONPG培养基：按照GB4789.28的规定执行。

2

DB34/T2997—2017

3.21缓冲葡萄糖蛋白胨水：按照GB4789.28的规定执行。

3.22蛋白胨水：按照GB4789.28的规定执行。

3.23硫酸亚铁琼脂：按照GB4789.28的规定执行。

3.24硝酸盐培养基与硝酸盐还原试剂：按照GB4789.28的规定执行。

3.25氧化酶试剂：按照GB4789.28的规定执行。

3.26Rustigian氏尿素培养液：按照GB4789.28的规定执行。

3.27无菌PBS溶液：制备方法见附录A中A.6。

4检验程序

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌检验操作程序见图1。

病料(鼻腔棉拭子、肺脏、淋巴结等)

病料(鼻腔棉拭子、肺脏、淋巴结等)

√

分离培养

改良TSA培养基、血平板培养基等

革兰氏染色

镜检

生化反应

PCR鉴定猪传染性胸膜肺炎放线杆菌

血清型鉴定

结果报告

动物实验

接种小鼠或

家兔

临床表现病理变化染色镜检分离培养

显微镜检查

直接涂片

选取可疑菌落涂片镜检、纯培养

改良B肉汤培养基

不

图1猪传染性胸膜肺炎防线杆菌检验操作程序

5操作步骤

5.1采样、运输和保存

5.1.1病料的采集标准

应符合SN/T1447的相关规定。

3

DB34/T2997—2017

5.1.2活体样品采集

用无菌棉拭子伸入鼻腔采