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拉氧头孢钠的细菌内毒素检测

目的：考察拉氧头孢钠细菌内毒素检查方法的可行性。方法：依据中华人民

共和国药典（二部）2010年版附录ⅪE细菌内毒素检查法，确定拉氧头孢钠的

有效稀释浓度和细菌内毒素检查限值。结果：拉氧头孢钠稀释为5mg/ml浓度时

对细菌内毒素试验无，其细菌内毒素限值为0.05EU/mg时符合规定。可采用细

菌内毒素检查法对本品进行质量控制。

标签：拉氧头孢钠；细菌内毒素；干扰试验；鲎试剂

拉氧头孢钠是半合成的氧头孢烯类抗生素，抗菌性能与第三代头孢菌素相

近，对多种革兰阴性菌有良好的抗菌作用。此外，由于该品的耐β-内酰胺酶的性

能强，微生物对该品很少发生耐药性。细菌内毒素试验利用鲎的变形细胞与微量

内毒素产生凝聚反应的现象，来判断样品中细菌内毒素限量是否符合规定，具有

简便、快速、灵敏度高、重现性好等优点。本文依据中华人民共和国药典（二部）

2010年版附录ⅪE细菌内毒素检查法的要求，考察拉氧头孢钠细菌内毒素检查

方法的可行性。

1材料与仪器

1.1试剂

鲎试剂：湛江安度斯生物技术有限公司生产，0.1ml/支，灵敏度：0.125EU/ml，

批号：1105272；以上鲎试剂经山东睿鹰先锋制药有限公司微生物实验室复核，

灵敏度符合规定，可用于细菌内毒素试验。

细菌内毒素工作标准品：中国药品生物制品检定所，120EU/支，批号：

201072。

细菌内毒素检查用水：湛江安度斯生物技术有限公司生产，5ml/支，批号：

1111280。

1.2样品

拉氧头孢钠，由山东睿鹰先锋制药有限公司生产，批号：201204106001、

201204106002、201204106003。

1.3仪器

万分之一天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）、电热鼓风干燥箱（上

海精宏实验设备有限公司）、电热恒温水浴槽（上海精宏实验设备有限公司）、旋

涡混合器（上海医科大学仪器厂）、温度计、试管架、封口膜、砂轮、75%酒精

棉球、金属直镊、玻璃移液管嘴、微量可调移液器、小试管、剪子等。所用热稳

定性器皿应在电热干燥箱250℃干烤60分钟以去除可能存在的外源性内毒素。

2方法与结果

2.1干扰试验预试验

预实验的目的是初步确定供试品的最大不干扰浓度或最小不干扰稀释倍数，

为正式干扰试验提供依据。将供试品进行一系列倍数的稀释，但最大的稀释倍数

不得超过MVD=CL/λ0.03

（1）干扰预试验供试液的制备：

称取适量拉氧头孢钠样品置玻璃试管中，用细菌内毒素检查用水1ml溶解制

成含拉氧头孢100mg/ml的供试品原液。

按下式计算供试品最大有效稀释倍数MVD

MVD=C*L/λ

式中L为拉氧头孢钠细菌内毒素限值0.05EU/mg,C为供试品原液含拉氧头

孢的浓度(mg/ml)，λ为凝胶法中鲎试剂的灵敏度标示值（EU/ml）

将含拉氧头孢浓度为100mg/ml的供试品原液用细菌内毒素检查用水依次稀

释制成5倍稀释液、10倍稀释液(即浓度为10mg/ml)、20倍稀释液（即浓度为

5mg/ml）、40倍稀释液（即浓度为2.5mg/ml）、80倍稀释液（即浓度为1.25mg/ml）、

160倍稀释液（即浓度为0.625mg/ml）.

（2）细菌内毒素工作标准品的制备将细菌内毒素工作标准品开启后加入

1ml细菌内毒素检查用水溶解，用封口膜封口，在旋涡混合器上混合15分钟制

成120EU/ml的内毒素标准溶液。将标准溶液依次稀释制成4λ（0.5EU/ml）、2λ

（0.25EU/ml）的细菌内毒素标准溶液（每一步稀释均不应超过10倍）：

（3）含标准内毒素浓度的供试品溶液的制备取供试品5倍稀释液、10倍

稀释液、20倍稀释液、40倍稀释液、80倍稀释液各0.2ml分别与0.5EU/ml（4λ）

的内毒素标准溶液等量旋涡混合30秒，即得含标准内毒素0.25EU/ml（2λ）的

供试品10倍稀释阳性对照液、20倍稀释阳性对照液、40倍稀释阳性对照液、80

倍稀释阳性对照液、160倍