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微生物限度检查方法适用性试验课件

微生物限度检查方法适用性试验方案

验证方案组织与实施

微生物限度检查方法适用性试验工作应由质量管理部门负责组织，

质量管理部门有关人员组成验证小组，参与实施。

方案起草

方案审核

方案批准

目录

一、概述

二、验证目的和风险评估

三、验证内容

四、方法判定

五、再验证周期

六、参考文献

七、结果评价及结论

1、概述：

微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生

物污染程度的方法。检查项目包括需氧菌数、霉菌数和酵母菌数及控

制菌检查。当建立产品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌、霉菌

和酵母菌计数方法的适用性试验和控制菌检查方法的适用性试验，以

确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌、霉菌和酵母菌数的测定和

控制菌检查。

由于依照中国药典2010版的检查方法验证,需氧菌、霉菌和酵母

菌、控制菌均采用平皿法。故现升级为中国药典2015版，需氧菌、霉

菌和酵母菌及控制菌均采用平皿法进行方法适用性试验。

2、试验目的和风险评估：

验证目的：确认所采用的需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法及控制

菌检查方法适合我公司所生产产品的微生物限度检查。

风险评估：

3、验证内容：

3.1、培养基来源：

确认人：确认日期：

3.2、检查用培养基配制方法：

确认人：确认日期：

3.3、使用仪器

确认人:确认日期：

3.4、验证试验用菌种：

确认人：确认日期：

3.5试验方法：

取供试品10g加PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml→1:10供

试液。需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌采用常规法。

3.6菌液的制备：

3.6.1取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽孢

杆菌的胰酪大豆胨琼脂斜面培物一铂金

饵，加入胰酪大豆胨液体培养基中置30～35℃培养箱中培养

18～24h，取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、枯草芽

孢杆菌的胰酪大豆胨液体培养物1ml加入9ml0.9％无菌氯化钠溶液中，

制成10-1的菌液，依法10倍稀释至10～7，分取各菌悬液1ml注入

平皿中，立即倾注胰酪大豆胨琼脂培养基20ml，各菌悬液平行制备两

个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌

液备用。

3.6.2取白色念珠菌的沙氏葡萄糖琼脂斜面培养物，加入沙氏葡萄

糖液体培养基中置20～25℃培养箱中培养24～48h，取白色念珠菌的

沙氏葡萄糖液体培养物1ml加入9ml0.9％无菌氯化钠溶液中，制成

10-1的菌液，依法10倍稀释至10～7，取菌悬液1ml注入平皿中，

立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml，各菌悬液平行制备两个平皿，

平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。

3.6.3取黑曲霉的新鲜培养物接种子沙氏葡萄糖琼脂斜面上，20-

25℃培养5-7天，加入3-5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化

钠溶液，将孢子洗脱。取1ml加入含0.05%聚山梨酯80的9ml0.9%

无菌氯化钠溶液中，制成10-1的菌液，依法10倍稀释至10～7，取，

取菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注沙氏葡萄糖琼脂培养基25ml，各

菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取小于100CFU/ml和

1000CFU/ml的菌液备用。

3.7需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法适用性试验：

3.7.1供试液制备：

取供试品10g（ml或cm2），加P