食品微生物学实验报告.pdfVIP

实验一玻璃器皿的准备、常用仪器的使用及培养基的制备

[实验目的]

1、系统掌握玻璃器皿的准备方法及常用仪器的使用。

2、掌握一般培养基制备的原则和要求，熟悉一般培养基制备的过程。

[实验原理]

一、玻璃器皿的无害处理：

1、新购置的玻璃器皿因含有游离碱，一般在2%的盐酸溶液中浸泡数小时后再用清

水洗净，也可在洗衣粉水中煮30-60min，取出用清水洗净。

2、常用玻璃器皿洗涤时可用鬃刷蘸取洗衣粉刷洗，然后用自来水冲洗干净。

3、带油污玻璃器皿先将倒空的玻璃器皿用10%的氢氧化钠浸泡半小时或放在5%的

苏打液内煮两次，去掉油污，再用洗衣粉和热水刷洗。

4、带菌玻璃器皿经121℃高压蒸汽灭菌20min后，趁热倒去内容物，再用洗衣粉水

刷洗干净，以水在内壁均匀分布成一薄层而不出现水珠为油垢除尽的标准。

经以上处理的玻璃器皿，可满足一般实验用。少数实验对玻璃器皿清洁度要求较高，除

用上述方法外，还应先用2%的HCl溶液浸泡数10min，再用自来水冲洗，蒸馏水淋洗

2-3次。有的尚需超纯水淋洗然后烘干备用。

二、玻璃器皿的包扎：吸管、平皿、瓶口等的包扎。

三、玻璃器皿的灭菌：分为两种，高压蒸汽灭菌法和干热灭菌法。

高压蒸汽灭菌法是湿热灭菌中应用最为广泛的一种方法。其原理是依据在一个密闭的高

压蒸汽灭菌器中，水的沸点随水蒸汽压的增加而上升，加压是为了提高水蒸汽的温度。

把待灭菌物品放在灭菌器内，当灭菌器内压力为0.1MPa时，温度可达到121℃，一般

维持20min，即可杀死一切微生物的营养体及其孢子。一般的培养基、玻璃器皿、金属

用具、实验服、传染性标本等均可用这种方法有效灭菌。灭菌的温度及时间视灭菌物品

中的微生物种类及数量而定。

干热灭菌法也叫热空气灭菌法。实验室通常使用恒温控制的电热鼓风干燥箱作为干热灭

菌器。此法常用于空的玻璃器皿、金属器具和其他耐高温的物品（如陶瓷培养皿盖、石

蜡油、碳酸钙）的灭菌。其优点是灭菌器皿保持干燥。但带有胶皮、塑料的物品、液体

及固体培养基不能用此法。干热灭菌一般以能否杀死细菌的芽孢作为彻底灭菌的标准，

160-170℃，2-3h方可杀死细菌的芽孢。

四、培养基的制备

培养基是用人工方法将多种物质按照各类微生物生长的需要而合成的一种混合营养基

质，一般用于分离和培养细菌。由于微生物的种类及代谢类型的多样性，故用于培养微

生物的培养基种类也很多。它们的配方及配制方法虽各有差异，但培养基的配制步骤却

大致相同。即先按配方称取药品，用少量水先溶解各成分，待完全溶解后补足水至所需

量，调整pH，然后将培养基分装于合适的容器中，经灭菌后使用或备用。同时应做无

菌检查。

制作培养基的要求：

(1)培养基必须含有细菌生长所需要的营养物质。

(2)培养基的材料和盛培养基的容器应没有抑制细菌生长的物质。

(3)培养基的酸碱度应符合细菌生长的要求。多数细菌生长适宜pH范围是弱碱性

(pH7.2～7.6)。

(4)所制培养基应均质透明，以便观察细菌的生长性状和其他代谢活动所产生的变化。

(5)必须彻底灭菌，不得含有任何活细菌。

[实验材料]

吸管若干、平皿5付、盐水瓶1个、中试管、小试管、脱脂棉、纱布等。

1、器皿：量筒(100mL)、烧杯(1000mL和100mL各一个)、漏斗、三角烧瓶(100mL)、试

管、玻棒、刻度吸管(1mL和10mL各一个)、pH试纸、纱布、脱脂棉、天平、电炉、试

管塞、包装纸、扎绳、洗耳球等。

2、试剂：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、磷酸氢二钾、琼脂条或粉、0.1mol/L和1mol/L的

氢氧化钠、0.1mol/L和1mol/L的盐酸溶液、蒸馏水、无菌的脱纤绵羊或家兔鲜血。

[实验内容]

一、各种玻璃器皿的包扎

二、棉塞的制作视管口大小取脱脂棉若干，顺纤维方向层叠，用力卷紧后用纱布包

扎，以套入视管口1/2为宜。

三、各种常用仪器的使用方法及注意事项

1、高压蒸汽灭菌器

操作方法：

加水：打开灭菌锅盖，加水适量（手提式高压锅加水到与支架圈平行处）。

装料：将带灭菌物品放于灭菌桶内，物品排放注意彼此间留有一定空隙，使蒸汽在容器

内能够流通达到每个物品的部位，以免形成蒸汽死角。物品不要紧靠桶壁，防止冷凝水

进入灭菌物品。

密封：将盖上的软管插入灭菌桶的槽内，使罐内冷空气自下而上排出，加盖，上下螺栓

口对齐，采用对角方式均匀旋转拧紧螺栓，使灭菌锅密闭。

加热:打开排气口（放气