微生物的培养与应用复习课件.ppt

课题1微生物的实验室培养

;无细胞结构：病毒;细菌的外形与大小;细胞壁;芽孢;红曲霉的次级代谢产物-----红曲;红曲的药用历史很悠久:

???据《天工开物》记载：“世间鱼肉最朽腐物，而此物薄施涂抹，能固其于炎暑之中，经历旬月，蛆蝇不敢近，色味不离初，盖奇药也。

“1977年，科学工作者WongHC和BauYS，首次发现M.Purpureus(红曲霉)培养物有抗菌活性，近来文献中又报道了色素对绿脓杆菌、大肠杆菌、甲型链球菌、白色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌和鸡霍乱弧菌等有杀灭或抑制作用。另外，有机酸主要是乳酸(占88.6%),还有琥珀酸少量草酸等也有抑菌作用这一发现与《天工开物》中的记载恰好吻合。;菌落;;1.何为培养基？;一、基础知识：;2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方(参考教材附录内容);培养基;固体培养基：菌落;1.何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？;1.无菌技术的概念;（2）灭菌的定义：;①煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min

②巴氏消毒法：70～75℃下煮30min或80℃下煮15min

③化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤消毒;用氯气消毒水源等

④紫外线消毒;最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。

有些玻璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。

而平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。;1．关于微生物营养物质的叙述中，正确的是

A、是碳源的物质不可能同时是氮源

B、凡碳源都提供能量

C、除水以外的无机物只提供无机盐

D、无机氮源也能提供能量;2．下面对发酵工程中灭菌的理解不正确的是

A、防止杂菌污染

B、消灭杂菌

C、培养基和发酵设备都必须灭菌

D、灭菌必须在接种前;3.微生物实验室培养的基本操作程序;四、实验操作;1．计算、称量

2．溶化

3．调pH：pH7．6

4．过???：这一步可以省去。

5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。

6．加塞

7．包扎;8．灭菌:

将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170℃下灭菌2h。;倒平板技术;倒平板技术;倒平板技术;倒平板技术;9．倒平板:

待培养基冷却到50℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种.

10．无菌检查：

将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。;3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？;（二）纯化大肠杆菌;平板划线的操作方法;;;;;;;;;;;一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的；

二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。;;;;问题讨论;稀释涂布平板法;1.将分别盛有9mL水的6支试管灭菌，并按101~106的顺序编号。;2.用移液管吸取1mL培养的菌液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。;3.从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第2步的操作。依次类推，直到完成最后一支试管的稀释。;注意：

移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管离火焰1~2cm处.;;;;;涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？;微生物的恒温培养;微生物的恒温培养;关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。;关注菌落的形态、大小、边缘、突起、颜色、质地等等，都是区分细菌的重要手段。;菌种的保存;本课题知识小结:;15.0g;②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？;（四）鉴定：筛选后必鉴定

鉴别培养基：不影响微生物的生存

酚红培养基：

鉴定分解尿素的细菌。

原理：脲酶催化尿素分解成氨→培养基碱性增强→酚红变红→脲酶阳性;