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小鼠过氧化氢酶的制备与测定
前言
过氧化氢酶是催化过氧化氢分解成氧和水的酶,存在于细胞
的过氧化物体内。过氧化氢酶是过氧化物酶体的标志酶,约占过
氧化物酶体酶总量的40%。过氧化氢酶存在于所有已知的动物
的各个组织中,特别在肝脏中以高浓度存在。过氧化氢酶在食品
工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶中的过氧化氢。过氧化氢
酶也被用于食品包装,防止食物被氧化。
过氧化氢酶(CAT)是一种酶类清除剂,又称为触酶,是以铁
卟啉为辅基的结合酶。它可促使HO分解为分子氧和水,清除
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体内的过氧化氢,从而使细胞免于遭受HO的毒害,是生物防
22
御体系的关键酶之一。CAT作用于过氧化氢的机理实质上是
HO的歧化,必须有两个HO先后与CAT相遇且碰撞在活性
2222
中心上,才能发生反应。HO浓度越高,分解速度越快。
22
几乎所有的生物机体都存在过氧化氢酶。其普遍存在于能
呼吸的生物体内,主要存在于植物的叶绿体、线粒体、内质网、
动物的肝和红细胞中,其酶促活性为机体提供了抗氧化防御机
理。CAT是红血素酶,不同的来源有不同的结构。在不同的组织
中其活性水平高低不同。过氧化氢在肝脏中分解速度比在脑或心
脏等器官快,就是因为肝中的CAT含量水平高。
过氧化氢酶在食品工业中被用于除去用于制造奶酪的牛奶
中的过氧化氢。过氧化氢酶也被用于食品包装,防止食物被氧化。
在纺织工业中,过氧化氢酶被用于除去纺织物上的过氧化氢,以
-1-
小鼠过氧化氢酶的制备与测定
保证成品是不含过氧化物的。它还被用在隐形眼镜的清洁上:眼
镜在含有过氧化氢的清洁剂中浸泡后,使用前再用过氧化氢酶除
去残留的过氧化氢。近年来,过氧化氢酶开始使用在美容业中。
一些面部护理中加入了该酶和过氧化氢,目的是增加表皮上层的
细胞氧量。
本实验所提取的过氧化氢酶来源于小鼠,其分子量约为
238KD,结构上由4个具有相同多肽链的亚基组成,是以铁卟啉
为辅基的结合酶,在407nm波长下有特征性的吸收。溶于水,
几乎不溶于乙醇、氯仿、乙醚等有机试剂,酸性环境下溶解度低
易析出,最适温度为37℃,最适pH值约为7.8。本实验以小鼠
肝脏为原料,根据过氧化氢酶溶解性和大分子等特性,通过组织
匀浆、盐析、透析、分子筛层析等步骤,提取纯化过氧化氢酶,
并对制备的过氧化氢酶进行蛋白浓度、分子量、米氏常数等测定。
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小鼠过氧化氢酶的制备与测定
目录
一、实验方案
二、实验目的
三、实验原理
四、实验过程
五、实验结果
六、实验讨论
七、注意事项
八、结果误差分析
九、结语
十、致谢
主要参考资料
【附】
-3-
小鼠过氧化氢酶的制备与测定
一、实验方案:
匀浆
制备过氧化氢酶盐析
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