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核因子受体活化因子配基试剂盒技术参数

核因子受体活化因子配基试剂盒实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定

标本中大鼠核因子kappa;B受体活化因子配基（RANKL）水平。用纯化的大

鼠核因子kappa;B受体活化因子配基（RANKL）抗体包被微孔板，制成固相

抗体，往包被单抗的微孔中依次加入核因子kappa;B受体活化因子配基

（RANKL），再与HRP标记的核因子kappa;B受体活化因子配基

（RANKL）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底

物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化

成zui终的黄色。颜色的深浅和样品中的核因子kappa;B受体活化因子配基

（RANKL）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通

过标准曲线计算样品中大鼠核因子kappa;B受体活化因子配基（RANKL）浓

度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml乘以1瓶7终止液6ml乘以1瓶2

酶标试剂6ml乘以1瓶8标准品（960pmol/L）0.5ml乘以1瓶3酶标包被

板12孔乘以8条9标准品稀释液1.5ml乘以1瓶4样品稀释液6ml乘以1

瓶10说明书1份5显色剂A液6ml乘以1瓶11封板膜2张6显色剂

B液6ml乘以1/瓶12密封袋1个标本要求1．标本采集后尽早进行提取，

提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不马上进行试验，可将标本

放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3

抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。核因子受体活化因子配基试剂盒使用方

法操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下

列图表在小试管中进行稀释。480pmol/L5号标准品150micro;l的原倍标准

品加入150micro;l标准品稀释液240pmol/L4号标准品150micro;l的5

号标准品加入150micro;l标准品稀释液120pmol/L3号标准品150micro;l

的4号标准品加入150micro;l标准品稀释液60pmol/L2号标准品

150micro;l的3号标准品加入150micro;l标准品稀释液30pmol/L1号标

准品150micro;l的2号标准品加入150micro;l标准品稀释液2.加样：分

别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准

孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50micro;l，待测样品孔中

先加样品稀释液40micro;l，然后再加待测样品10micro;l（样品zui终稀释

度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混

匀。3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。4.配液：将30倍浓缩

洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩

干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。6.加酶：

每孔加入酶标试剂50micro;l，空白孔除外。7.