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凝胶法细菌内毒素检查中常遇的问题及解决方法

陈邦树广西壮族自治区药品检验所广西南宁530021

[摘要]目的：探讨凝胶法细菌内毒素检查中常遇的问题及解决方法。方法：对实际工作中遇到

的一些具体问题进行多侧面的分析。结果：对凝胶法细菌内毒素检查中常遇的问题进行分析并提出了解

决方法。结论：凝胶法细菌内毒素检查法影响因素较多，存在的问题仍需多方努力进行克服。

[关键词]凝胶法环境内毒素鲎试剂问题

SomecommonlyencounteredproblemsandSolutionmethodsonGel-clotbacterialendotoxins

test

CHENBang-shu（GuangxizhuangAutonomousRegionInstituteforDrugControl，Nanning

530021）

[Keywords]Gel-clot;naturalbacterialendotoxins;TAL;problems

细菌内毒素检查法的优越性已为大多数质检人员所体会和认识。但在实际工作中，也有一些问题使

实验者感到困惑。因此，作者认为有必要对这些问题提出并加以探讨，供大家参考。

1.选择鲎试剂（TAL）的灵敏度值等于样品原液细菌内毒素限值进行试验是最佳方案吗？

未必！选择TAL的灵敏度值等于样品原液细菌内毒素限值进行试验，无疑可节省对样品的稀释，但

却不利于减少样品溶液对细菌内毒素试验干扰的可能性。中国药典从1998年增补本[1]开始的细菌内毒

素检查法已增加了供试品阳性对照（PPC）管，如因样品溶液浓度较高而出现PPC管不凝的情况，会导致

试验无效，结果最佳“方案”可能变成重试方案。如今，国内TAL的制备技术得到了较大的发展，更高灵敏

度（0.25EU.ml-1、0.125EU.ml-1、0.06EU.ml-1、0.03EU.ml-1）的TAL供应已不成问题。为减

少样品溶液对细菌内毒素试验的干扰和避免上述重试情况的产生，不如开始就选择更灵敏的TAL并对样品

原液作MVD稀释后进行试验。

2.阳性管（PC管）不凝，为什么？

原因无非3个方面。⑴、试剂问题〔包括内毒素和TAL〕。⑵、实验条件问题。⑶、操作问题。

近年，国产TAL活性较稳定，其稳定性可达室温保存2-3年；细菌内毒素亦具有耐热性，通常在其

有效期内常温保存或运输其活性不受影响。唯需注意的是，使用小装量的试剂（包括内毒素和TAL）较使

用大装量的试剂容易导致PC管不凝的情况发生。这是由于小装量的试剂较之大装量的试剂更不易控制支

间差异所致。尽管如此，我们仍有理由相信在大多数情况下试剂不是造成PC管不凝的主要原因。如我们

自1995年使用旋涡混合器以来，在本所实验室条件下，细菌内毒素试验尚未见到PC管不凝的情况。个别

单位发现PC管不凝后，把TAL及内毒素拿到本实验室再进行试验，结果PC管凝得很好。但是，当我们

自备试剂到外单位抽检并就地进行细菌内毒素试验时，却在2个实验室发现过PC管不凝的情况。究其原

因，认为保温环节出问题的可能性最大。一次是保温过程中水浴箱电源插座接触不良，恒温不能保证，实

验结束时发现水浴温度已由原来的37.2℃变成了36.0℃；另一次是某单位使用无盖式恒温水浴锅代替有

盖式电热恒温水浴箱，水表层的温度可能并未达到37℃。由于TAL的成胶时间与温度在一定的范围内呈

负相关。温度偏低将使成胶时间延长。这样，在规定的时间里PC管不凝也就不足为奇了。造成水浴温度

实际偏低的另一原因，还可能是因为实验者把温度计放在发热管附近监测反应温度所致。我们主张采用电

热恒温水浴箱上的水银温度计监测反应温度。精确的控温是试验取得准确结果的重要保证。此外，操作上

我们还应注意内毒素的溶解稀释过程要按药典的规定进行（振荡的时间及强度要保证），以使内毒素的磷

脂A部分（毒力活性部位，也是与TAL结合的部位）能通过激烈振荡充分暴露。

3.同一批检品进行多次细菌内毒素检查时，有