DB34T 1891-2013 活毒疫苗中禽白血病病毒污染检测技术规程　.pdfVIP

ICS11.220

B41

DB34

安徽省地方标准

DB34/T1891—2013

活毒疫苗中禽白血病病毒污染检测

技术规程

DiagnosticTechnologySpecificationonAvianLeukosisVirusContaminationof

LiveAttenuatedVaccine

2013-05-10发布2013-06-10实施

安徽省质量技术监督局发布

DB34/T1891—2013

前言

本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。

鸡白血病是由反转录病毒科禽反转录病毒属的禽白血病病毒（ALV）引起的鸡的传染性肿瘤疾病，

以垂直传播为主，也可水平传播，是鸡的主要种源性免疫抑制病之一。近年来，鸡白血病的流行日趋严

重，活毒疫苗的污染是引起传播的重要因素，检测活毒疫苗中ALV的污染对防控鸡白血病具有重要意

义。

为了预防、控制和消灭鸡白血病，依据《中华人民共和国动物防疫法》及有关的法律法规，特制定

本规程。

本标准由安徽省农业科学院畜牧兽医研究所提出。

本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。

本标准起草单位：安徽省农业科学院畜牧兽医研究所。

本标准主要起草人：胡晓苗、张丹俊、侯宏艳、潘孝成、赵瑞宏、戴银、周学利、刘慧芳、沈学怀、

朱传民。

I

DB34/T1891—2013

活毒疫苗中禽白血病病毒污染检测

技术规程

1范围

本标准规定了活毒疫苗中ALV污染的ELASA和PCR检测技术。

本标准适用于活毒疫苗中ALV污染的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

NY/T680-2003禽白血病病毒p27抗原酶联免疫吸附试验方法

中华人民共和国动物防疫法

3弱毒疫苗的稀释方法

取1000羽份冻干苗1瓶，加2毫升灭菌生理盐水进行稀释，使100微升(0.1毫升)中含疫苗

50羽份。取100ul稀释液进行ELISA检测，取200ul稀释液提取DNA，进行PCR检测。

4检测方法

4.1酶联免疫吸附试验（ELISA）检测

按NY/T680-2003的要求进行，试验成立条件略做修改，阳性对照OD均值减去阴性对照OD均

值改为大于0.20时试验成立，否则重做。

注：也可选择市售商品化p27抗原ELISA检测试剂盒，完成疫苗p27抗原的检测。

4.2聚合酶链式反应（PCR）检测

4.2.1材料

Taq酶、dNTP、DNAMarker、琼脂糖、细胞裂解液、酚、氯仿、异戊醇、ddH2O、75％乙醇、特异

性引物、PCR仪、高速台式冷冻离心机（最大转速16000rpm）、冰箱、水浴锅、微量移液器、电泳仪、

电泳槽、紫外凝胶成像仪。

4.2.2操作方法

4.2.2.1DNA的提取

a)阳性对照与样品同时提取DNA，实验应使用灭菌超纯水作为阴性对照。取疫苗稀释液和细胞裂