人11去氢血栓烷B2(11-DH-TXB2)ELISA检测试剂盒说明书.pdfVIP

人11去氢血栓烷B2（11-DH-TXB2）ELISA检测试剂

盒说明书

人11去氢血栓烷B2（11-DH-TXB2）ELISA检测试剂盒检测原理

 试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人

11去氢血栓烷B2（11-DH-TXB2）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标

准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB

在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成zui终的黄色。颜

色的深浅和样品中的人11去氢血栓烷B2（11-DH-TXB2）呈正相关。用酶标

仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品浓度。

 样品收集、处理及保存方法

 1.血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收

集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

 2.血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

 3.细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

 4.组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

 5.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，

避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

 自备物品

 酶标仪（450nm）高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-

1000uL37℃恒温箱操作注意事项

 试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液

会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。实验中不

用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。标准品稀释液即可

视为阴性对照或者空白；预处理后的样本无需稀释，直接取10mu;L加样即

可。严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。所有液体

组分使用前充分摇匀。试剂盒组成

 名称

 96孔配置

 48孔配置

 备注

 微孔酶标板

 12孔乘以8条

 12孔乘以4条

 无

 标准品（80pg/mL）

 0.6mL

 0.6mL

 按说明书进行稀释

 标准品稀释液

 6mL

 3mL

 无

 样本稀释液

 6mL

 3mL

 无

 检测抗体-HRP

 10mL

 5mL

 无

 20乘以洗涤缓冲液

 25mL

 15mL

 人11去氢血栓烷B2（11-DH-TXB2）ELISA检测试剂盒按说明书进行稀释

 底物A

 6mL

 3mL

 无

 底物B

 6mL

 3mL

 无

 终止液

 6mL

 3mL

 无

 封板膜

 2张

 2张

 无

 说明书

 1份

 1份

 无

 自封袋

 1个

 1个

 无

 注：标准品用标准品稀释液依次稀释为：80、40、20、10、5、2.5pg/mL

 试剂的准备

 20乘以洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20乘以洗涤缓

冲液加19份的蒸馏水。

 洗板方法

 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，

在吸水纸上拍干，如此洗板5次。自动洗板机：每孔注入洗液350mu;L，浸

泡1min，洗板5次。操作步骤

 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放

回4℃。设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品

50mu;L；待测样本孔先加待测样本10mu;L，再加样本稀释液40mu;L；

随后标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体

100mu;L，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。弃去液

体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍