驴驹大肠杆菌病防治技术规程.docx

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驴驹大肠杆菌病防治技术规程

范围

本文件规定了驴驹大肠杆菌病的流行病学、临床症状、病理变化、诊断、预防、治疗、病死驴及病害驴处理和档案管理。

本文件适用于养驴场驴驹大肠杆菌病的防治。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

GB39707医疗废物处理处置污染控制标准

NY/T388畜禽场环境质量标准

NY/T541兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范

NY5027无公害食品畜禽饮用水水质

NY/T5030无公害农产品兽药使用准则

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

驴驹大肠杆菌病donkeyfoalscolibacillosis

由O78、O101、O8等主要血清型的致病性大肠杆菌引起驴驹的急性、接触性传染病。

病例特征呈现剧烈的下痢和败血症症状。

流行病学

病原特点

病原为肠杆菌科大肠埃希氏菌属中O78、O101、O8等主要血清型的致病性大肠杆菌。病原菌为革兰氏阴性菌，在驴驹肠道及其粪便污染的环境中广泛存在。

传染源

发病驴驹和携带致病性大肠杆菌的驴。

传播途径

该病通过消化道传播，粪-口传播是主要途径。病原菌污染粪便、圈舍、饲料、水槽及饮水等均可传播。可通过脐带或分娩时经产道传播。

易感动物

8月龄内的驴驹均可发病，多于出生后2?d～3?d发病。

发病特点

一年四季均可发生，以冬末初春季节交替时段多发，潜伏期为1?d～2?d。发病率为5%～40%，病死率为2%～20%。

临床症状

驴驹发病初期体温升高，精神沉郁，食欲不振，粪便粥样或水样，剧烈腹泻，肛门失禁，排出液状粪便，呈黄色、白色或灰白色，有时含多量黏液或血液，腥臭味。发病中期出现衰弱，脱水，喜躺卧，无法站立。发病末期，食欲废绝，腹泻和便秘交替发生，由败血症和全身微循环衰竭致死。

病理变化

胃黏膜脱落，有出血点和出血斑。小肠、盲肠和结肠表现为黏膜脱落。肝脏肿大、淤血。脾肿大，包膜下有出血点。心内膜和外膜也有出血点，肠系膜淋巴结肿大、出血。

诊断

临床诊断

驴驹出现腹泻或败血症等症状可假定大肠杆菌感染，根据流行病学、临床症状和病理变化等做出初步临床诊断。

实验室诊断

见附录A。

采样

按NY/T541的规定执行，主要采集肛拭子、腹泻物等病料。

细菌分离培养

无菌取病料，经三区划线接种于麦康凯培养基上，37?℃恒温培养24?h，培养出表面光滑、粉红色圆形菌落。挑取符合大肠杆菌特征的单菌落纯化3次～4次。

显微镜检

将单菌落革兰氏染色，镜检，油镜下呈现两端钝圆，单在或成对的革兰氏阴性菌。

生化鉴定

将纯化后的细菌接种于葡萄糖、甘露醇、乳糖、麦芽糖、吲哚试验、V-P试验、甲基红试验、枸橼酸盐试验管，37?℃恒温培养24?h后观察。结果显示：葡萄糖产酸产气、甘露醇产酸产气、乳糖产酸产气、麦芽糖产酸产气、吲哚试验和甲基红试验呈阳性，V-P试验和枸橼酸盐试验呈阴性。

大肠杆菌O血清型鉴定

将纯化的大肠杆菌接种于LB固体培养基上，37?℃培养24?h，用0.5%石炭酸生理盐水洗下菌苔，制成浓稠悬液，经121?℃高压2?h，制备O抗原。取洁净玻片，吸取O抗原滴于玻片两端，一滴加入10?μL抗O血清，一滴加入等量生理盐水。轻轻晃动玻片，倾斜玻片30°于1?min内观察试验现象。按照表A.1进行判定，出现“++”及以上凝集反应判定阳性结果。

分离菌株16SrDNA序列测定

提取分离菌基因组DNA为模板扩增16SrDNA序列。引物序列按照附录A。PCR反应体系为模板（基因组DNA20?ng/μL～50?ng/μL）2?μL，2×TaqPCRMasterMix12.5?μL，上下游引物（20?μmol/L）各1?μL，ddH2O8.5?μL，共25?μL反应体系。PCR反应程序为95?℃预变性5?min；95?℃变性15?s，53?℃退火15s，72?℃延伸2min，共30个循环；最终72?℃延伸5?min，4?℃暂时保存。通过1%X脂糖凝胶电泳鉴定。片段大小约为1?500?bp。回收并纯化PCR产物，按照双脱氧链终止法测序。

结果判定

将PCR测序结果使用NCBI中的BLAST进行检索，是否与数据库序列一致。应根据临床诊断和实验室诊断结果确诊该病。

实验室生物安全

按照GB19489规定执行。

预防

环境卫生

按NY/T388和NY5027的规定执行。夏季食槽和水槽应及时清理。

生物安全

生产区内不得饲养其他动物，不应屠宰和解剖病死驴，不带入其他畜产品。料库应有防鼠防鸟设施。

管理

妊娠母驴