水产养殖环境（水体、底泥）中地西泮的测定+液相色谱串联质谱法.docx

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水产养殖环境（水体、底泥）中地西泮的测定

液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件规定了水产养殖环境（水体、底泥）中地西泮的液相色谱-串联质谱测定方法。

本文件适用于我省水产养殖环境（水体、底泥）中地西泮的测定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB17378.5海洋监测规范第5部分：沉积物分析

HJ494水质采样技术指导

SL187水质采样技术规程

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4方法原理

水体试样经过滤，底泥试料经氨化乙酸乙酯提取，氮气浓缩。所得样液加入甲酸酸化，固相萃取柱富集净化，液相色谱串联质谱仪测定，内标法定量。

5试剂与材料

5.1试剂

除特殊注明外，所用试剂均为分析纯，实验用水为符合GB/T6682规定的一级水。

5.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。

5.1.2乙酸乙酯：色谱纯。

5.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。

5.1.4氨水（NH3?H2O）：分析纯。

5.2溶液配制

5.2.11%氨水-乙酸乙酯：取5mL氨水（5.1.4）加入495mL乙酸乙酯中，混合均匀，备用。

5.2.21%甲酸-水溶液：取10mL甲酸（5.1.3）加入990mL水中，混合均匀，备用。

5.2.35%氨水-乙腈溶液：取25mL氨水（5.1.4）加入475mL乙腈（5.1.1）中，混合均匀，备用。

5.2.4流动相（0.1%甲酸-水溶液）：取1mL甲酸（5.1.3）加入1000mL水中，混合均匀，备用。

5.3标准品

5.3.1地西泮（Diazepam，C16H13ClN2O，CAS号：439-14-5），纯度≥99.9%。

氘代地西泮（Diazepam-d5，C16H8D5ClN2O，CAS号：65854-76-4），纯度≥99.9%。

5.4标准溶液配制

5.4.1标准储备液（0.10mg/mL）：取10mg地西泮（5.3.1）标准品，用乙腈（5.1.1）溶解并稀释定容至100mL，配制成浓度均为0.10mg/mL的标准储备液。-18℃避光保存，有效期12个月。

5.4.2内标储备液（0.10mg/mL）：称取10mg氘代地西泮（5.3.2）标准品，用乙腈（5.1.1）溶解并稀释定容至100mL，配制成浓度均为0.10mg/mL的标准储备液。-18℃避光保存，有效期12个月。

标准中间液（1.0μg/mL）：准确移取地西泮标准储备液（5.4.1）1mL，于100mL容量瓶中，用乙腈（5.1.1）稀释至刻度，配制成浓度为1.0μg/mL的标准中间液。-18℃避光保存，有效期6个月。

5.4.4内标中间液（1.0μg/mL）：准确移取氘代地西泮标准储备液（5.4.2）1mL，于100mL容量瓶中，用乙腈（5.1.1）稀释至刻度，配制成浓度为1.0μg/mL的内标中间液。-18℃避光保存，有效期6个月。

5.4.5标准使用液（0.10μg/mL）：准确移取5.00mL地西泮标准中间液（5.4.3）于50mL棕色容量瓶中，用乙腈（5.1.1）稀释至刻度，配制成浓度为0.10μg/mL的标准使用液。于4℃下避光保存，有效期1个月。

5.4.6内标使用液（0.10μg/mL）：准确移取5.00mL氘代地西泮内标中间液（5.4.4）于50mL棕色容量瓶中，用乙腈（5.1.1）稀释至刻度，配制成浓度为0.10μg/mL的内标使用液。于4℃下避光保存，有效期1个月。

5.5材料

5.5.1混合型强阳离子交换（MCX）固相萃取小柱：150mg/6mL，或者相当者。

5.5.2微孔滤膜:0.22μm聚四氟乙烯滤膜。

5.5.3玻璃纤维滤纸（GF/F）：孔径0.45μm。

6仪器与设备

6.1液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源。

6.2分析天平：感量0.01g和0.0001g。

6.3冷冻干燥机。

6.4涡旋混合器。

6.5高速离心机。

6.6超声波清洗器。

6.7固相萃取装置，带真空泵。

6.8氮吹仪。

7样品

7.1样品采集

水样按SL187规定的方法进行采集。底泥样品按HJ494规定的方法进行采集。

7.2试样的制备

采集的水样经玻璃纤维滤纸（）过滤后，置于样品瓶中，在0℃～4℃避光保存。采集的底泥样品经冷冻干燥机冷冻干燥后，剔除石块和植物体等异物，用研钵研磨后过60