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实验5蚕豆根尖细胞微核检测技术
一原理微核(Micronucleus,MCN),也叫卫星核,是真核生物
细胞中的一种异常结构,是染色体畸变在间期细胞中的
一种表现形式。微核是各种理化因子,如辐射,化学药
剂对分裂细胞作用产生的。在细胞间期,微核呈圆形或
椭圆形,游离于主核之外,大小应在主核1/3以下。其折
光率及细胞化学反响性质与主核一样,也具有合成DNA的
能力。
一般认为微核是有丝分裂后期丧失着丝粒的染色体断
片产生的。这些断片或染色体在分裂过程中行动滞后,
在分裂末期不能进入主核,便形成了主核之外的核块。
二目的当子细胞进入下一次分裂间期时,它们便浓缩成主核之
外的小核,即形成了微核。微核率的多少与和作用因子
学习蚕豆根尖细胞微核制片与检测技术,了解该技术在诱变作
的剂量或辐射累积效应有正相关。
用检测上的应用。
微核测试用于辐射损伤、辐射保护、化学诱变剂、新
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药试验、食品添加剂的平安评价,以及染色体遗传疾病
三材料
蚕豆根尖〔新鲜的固定材料
四步骤
1蚕豆浸种催芽
2待测液对根尖的处理
3根尖细胞的恢复培养
4根尖的固定
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5根尖的酸水解:将固定的幼根放入青霉素瓶中,用dH2O浸洗2
次,除去水后参加5NHCL将幼根泡住,放入30OC水浴中水解28min
左右〔水解时间与水温有反相关关系〕,待幼根软化〔同时变为半
透明〕即可取出,用dH2O浸洗幼根2次,5min/次。
6制片:将幼根放在擦净的载片上,用解剖针截下4mm左右的根尖
局部,捣碎,参加1-2滴改进苯酚品红染色液,染色10分钟左右,
然后加盖片,压片。
7镜检:先在低倍镜下找出具微核的细胞,再转入高倍镜进行仔细
观察。
五作业
绘出一个具微核的蚕豆根尖细胞图。
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附微核识别标准:
1、但凡主核大小的1/3以下,并与主核别离的
小核;
2、小核着色与主核相当或稍浅;
3、小核形态可为圆形,椭圆形,不规那么形等。
凡符合以上3条的小核就是微核〔
micronucleus,MN)
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微核形成机制:
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附:实验数据的处理和污染程度的划分
将微核观察记录于表上
片号镜检日期镜检者
各次观察的
细胞数与微
核数
微核数/细胞
数
总计
微核千分率
(MN%o)平
均值
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1〕各测试样品〔包括对照组〕微核千分率〔MN‰)的计算为:
MN‰=某测试样点〔或对照〕观察到的微核数/某测试样点〔或对照
〕观察的细胞数〕
MN‰在10‰以下的为根本污染
10‰-18‰区间为轻度污染
18‰-30‰区间为中度污染
30‰以上为严重污染
注:每个处理观察3个根尖,每个根尖记数1000个细胞,统计其中
含微核的细胞数然后平均,即为该处理的微核千分率。
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2〕污染指数〔pollutionindex)
污
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