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实验五蛋白质的颜色反响
及沉淀反响
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蛋白质颜色反响原理
蛋白质分子中的某种或某些基团与显色剂作用,可产生特定的颜色反响
不同蛋白质所含氨基酸不完全相同,颜色反响亦可不同。颜色反响不是蛋白质
的专一反响,一些非蛋白物质亦可产生相同的颜色反响,因此不能仅根据颜色
反响的结果断定被测物是否是蛋白质。颜色反响是一些常用的蛋白质定量测定
的依据
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常见的蛋白质颜色反响
1.米伦氏反响
2.双缩脲反响
3.黄色反响
4.茚三酮反响
5.乙醛酸反响
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〔一〕米伦氏〔Millon〕反响
原理:米伦试剂为硝酸、亚硝酸、硝酸汞和亚硝酸汞之混合物,能与苯酚、
双酚及某些羟苯衍生物产生颜色反响。这些反响最初产生的有色物质可能为羟
苯之亚硝基衍生物,经变位作用变成颜色更深的邻醌肟,最终形成红色稳定产
物。组成蛋白质的氨基酸中只有酪氨酸为羟苯衍生物,因此该反响为酪氨酸的
显色反响〔酚羟基反响〕。
本卷须知:加热时容易产
暴沸,要注意平安,应温和加热。
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〔二〕双缩脲反响
原理:将尿素加热,两分子尿素放出一分子氨而形成双缩脲。双缩脲在碱性环境
中,能与硫酸铜结合成红紫色的络合物,此反响为双缩脲反响。蛋白质分子中含有肽
键与缩脲结构相似,故能呈此反响。一般肽键越多颜色越深,而且受蛋白质特异性影
响小
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本卷须知:硫酸铜不能多加,否那么会产生影响观察的蓝色络离子
Cu(NH3)42+
〔三〕黄色反响
原理:蛋白质分子中含有苯核结构的氨基酸〔如酪氨酸、色氨酸等〕,遇到硝酸
可硝化成黄色物质,此物质在碱性环境中变为橘黄色的硝苯衍生物。这是含酪氨酸和
色氨酸蛋白质所特有的反响。皮肤、指甲和毛发等遇浓硝酸变黄,原因在此。
〔四〕茚三酮反响
原理:蛋白质与茚三酮共热,那么产生蓝色的复原茚三酮、茚三酮和氨的缩合
物。此反响为一切蛋白质及-氨基酸所共有。
本卷须知:反响必
须在pH5-7进行。
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〔五〕乙醛酸反响
含色氨酸的蛋白质在浓硫酸中与一些醛类反响
能形成有色物质。此反响可作为色氨酸的定性定量
反响。
实验步骤
1、在蛋白质溶液中参加
HCOCOOH,将浓硫酸沿管壁
缓慢参加,不使相混,在液
面交界处,即有紫色环形成
2、色氨酸的反响〔吲哚环
的反响〕
3、鉴定蛋白质中是否含有
色氨酸
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蛋白质沉淀反响原理
在水溶液中蛋白质分子的外表由于形成水化层和双电层,而成为稳定的胶
颗粒。但这种稳定性是有条件的、相对的。在一定的物理化学因素影响下,蛋白
质颗粒失去电荷,脱水,甚至变性而丧失稳定因素,即以固态形式从溶液中析出,
这种作用称为蛋白质的沉淀反响。
可逆沉淀反响:在发生沉淀反响时,蛋白质虽已沉淀析出,蛋白质分子内部结
构并未发生显著变化,根本上保持原有的性质。除去沉淀因素后,蛋白质沉淀可
再溶于原来的溶剂中。
不可逆沉淀反响:在发生沉淀反响时,蛋白质分子内部结构,特别是天然结构
遭到破坏,失去其天然蛋白质的原来性质,这种蛋白质沉淀不能再溶解于原来的
溶剂中。
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常见的蛋白质沉淀反响
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