高考生物一轮复习选择性必修3课时课件合集共4套.ppt

Ⅱ.N蛋白胞外段单克隆抗体制备，流程如图2。图2 (3)用N蛋白胞外段作为抗原对小鼠进行免疫后，取小鼠脾组织用____________酶处理，制成细胞悬液，置于含有混合气体的________中培养，离心收集小鼠的B淋巴细胞，与骨髓瘤细胞进行融合。 (4)用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到96孔板，进行________培养。用____________技术检测每孔中的抗体，筛选既能产生N蛋白胞外段抗体，又能大量增殖的单克隆杂交瘤细胞株，经体外扩大培养，收集_________，提取单克隆抗体。(5)利用N蛋白胞外段抗体与药物结合，形成______________，实现特异性治疗。 解析：(1)构建重组慢病毒质粒时，选用氨苄青霉素抗性基因作为标记基因，目的是含有氨苄青霉素的培养基可以筛选出病毒包装细胞。脂质体是一种人工膜，在水中磷脂分子亲水头部插入水中，脂质体疏水尾部伸向空气，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体，用脂质体将重组慢病毒质粒与辅助质粒导入病毒包装细胞，质粒被包在脂质体双分子层中。(2)质粒在包装细胞内组装出由含N蛋白胞外段基因的核酸和蛋白质外壳组成的慢病毒，用慢病毒感染海拉细胞进而表达并分离、纯化N蛋白胞外段。(3)小鼠脾组织用胰蛋白酶处理，使其分散，制成细胞悬液，置于含有混合气体(95%空气和5%二氧化碳)的二氧化碳培养箱中培养。(4)用选择性培养基对融合后的细胞进行筛选，获得杂交瘤细胞，将其接种到96孔板，每个孔尽量只接种一个杂交细胞，进行克隆化培养，利用抗原—抗体杂交法筛选，经体外扩大培养，收集细胞培养液，提取单克隆抗体。(5)利用N蛋白胞外段抗体与药物结合，形成ADC(抗体—药物偶联物)，实现特异性治疗。答案：(1)检测目的基因是否成功导入受体细胞双分子层中(2)含N蛋白胞外段基因的核酸和蛋白质外壳(3)胰蛋白酶或胶原蛋白二氧化碳培养箱(4)克隆化抗原—抗体杂交细胞培养液(5)ADC(抗体—药物偶联物)【考向集训】 4.(2023年广东佛山摸底)人乳头状瘤病毒(HPV)与宫颈癌的发生密切相关，抗HPV的单克隆抗体可以准确检测出HPV，从而及时监控宫颈癌的发生。下图是以HPV衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体的过程，回答下列问题。(1)单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有__________________________。 (2)写出以小鼠甲的脾脏为材料制备单细胞悬液的主要实验步骤：____________________________________________________________________________________________________________。 (3)在杂交瘤细胞筛选过程中，常使用特定的选择培养基(如HAT培养基)，该培养基对________________和_______________生长具有抑制作用。(4)对于________的杂交瘤细胞应尽早进行克隆化，以增加其数量。 (5)科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因(prG)，该基因能激发动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。除本题描述的制备单克隆抗体技术外，请再简要写出两种制备单克隆抗体的思路：_________________________________________________________________________________________________________________________________。 解析：(1)单克隆抗体制备的基本步骤，对小鼠进行免疫→提取B淋巴细胞→将B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合→通过筛选、克隆化培养和扩大化培养→最终注入小鼠体内→从腹腔腹水中提取单克隆抗体，因此单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有动物细胞培养、动物细胞融合。(2)要制备单细胞悬液，主要步骤为从小鼠甲体内取出脾脏，剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理一段时间，使培养的细胞分散开来，加入培养液制成单细胞悬液。(3)在杂交瘤细胞筛选过程中，用特定的选择培养基进行筛选，如HAT培养基，在该培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长。(4)克隆化的原则是，对于检测抗体阳性的杂交瘤细胞应尽早进行克隆化，否则抗体分泌的细胞会被抗体非分泌的细胞所抑制，因为抗体非分泌细胞的生长速度比抗体分泌