生物分离工程-第八章-电泳技术课件.pptVIP

凝胶浓度(C=2.6%)分子量范围(kDa)凝胶浓度(C=5%)分子量范围(kDa)530~200560~7001015~1001022~2801510~501510~200202~15205~150凝胶浓度与分子量测定的关系PAGE的具体操作过程制胶:确定凝胶配方（凝胶、引发剂、增速剂的浓度和缓冲液），使用灌胶模具灌胶；样品准备:选择合适的样品缓冲液、确定合适的样品浓度（1~2mg/L，考染），加样（溴酚蓝）；电泳:4~6小时，待溴酚蓝前沿到达阳极底部；检测:紫外扫描或染色（考马斯亮蓝R-250、银染色—灵敏度比考染高100倍、荧光探针）；照相、凝胶干燥:定量测定:SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳主要用于测定蛋白质亚基分子量以及未知蛋白质分子量的测定；特点:设备简单、操作简便、测定快速、重复性高、样品无需纯化。SDS的原理蛋白质分子的解聚SDS是一种阴离子去污剂,作为变性剂和助溶性试剂,能断裂分子内和分子间的氢键,使分子去折叠,破坏蛋白质分子的二级、三级结构；而强还原剂,如二硫苏糖醇、β-巯基乙醇能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。因此,在样品和凝胶中加入SDS和还原剂后,蛋白质分子被解聚为组成它们的多肽链,解聚后的氨基酸侧链与SDS结合后,形