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动物新型疫苗研究进展(2)

三、基因缺失疫苗

基因缺失疫苗是用基因工程技术将病毒致病性基因进行缺失，从而获得弱毒株活疫苗。用基因突变、缺失和插入的方法使病原体致弱，研制新的基因工程苗统称为重组疫苗。在微生物基因组插入或添加基因的方法制成的疫苗又称为基因添加疫苗。由于这些基因的变化，一般不是点突变，故其毒力更为稳定，返突变机率更小，疫苗安全性好、不易返祖；其免疫接种与强毒感染相似，机体可对病毒的多种抗原产生免疫应答；免疫力坚实，免疫期长，尤其是适于局部接种，诱导产生黏膜免疫力，因而是较理想的疫苗。目前已有多种基因缺失疫苗问世，例如：伪狂犬病毒基因缺失疫苗：该苗是通过研制伪狂犬病毒TK－缺失突变体使病毒致弱而获得，是986年月得到美国FDA批准从实验室到市场的第一个基因工程苗。在注册之前即已证明该疫苗无论是在环境中还是对动物都比野生型病毒和常规疫苗弱毒更安全。后来的伪狂犬病基因缺失苗所使用的缺失突变体，同时缺失TK基因和gpE、gpC和gpG三种糖蛋白基因中的一种。这种新一代的基因缺失苗产生的免疫应答很容易与自然感染的抗体反应区别开来，又称为“标记”疫苗，它有利于疫病的控制和消灭计划。霍乱弧基因缺失疫苗：将霍乱弧苗A亚基基因中94％的A基因切除，保留了A和全部B基因，再与野生菌株同源重组筛选出基因缺失变异株，而获得无毒的活菌苗。大肠杆菌基因缺失疫苗：将大肠杆菌LT基因的A亚基基因切除，将B亚基基因克隆到带有粘着菌毛大肠杆菌中，制成不产生肠毒素的活菌苗。

四、多肽疫苗

多肽疫苗是用化学合成法或基因工程手段合成病原微生物的保护性多肽或表位并将其连接到大分子载体上，再加入佐剂制成的疫苗。随着抗原表位作图技术研究进展，将抗原表位精确定位于某几个氨基酸残基成为可能。因此，如果某些线性中和抗原在完整蛋白中呈弱免疫原性，不利于制备疫苗时，则可通过基因工程技术，将这些线性抗原表位进行体外表达，使其抗原结构充分暴露，便可增强其免疫原性。当然，这些抗原表位单独存在时，其免疫原性常常较低，需通过下列个途径加以改进：与其他颗粒抗原进行融合蛋白表达；将其与无毒力的结核菌素或霍乱毒素等细菌蛋白连接；自身串联表达，形成复合肽。多肽疫苗的优点是可在同一载体上连接多种保护性肽链或多个血清型的保护性抗原肽链，这样只要一次免疫就可预防几种传染病。目前研制成功的多肽疫苗还不多，除口蹄疫合成肽疫苗外，还有乙型肝炎和疟疾合成肽疫苗的报道。该类疫苗的缺点是制造成本较高。

五、基因疫苗

基因疫苗包括DNA疫苗和RNA疫苗，目前，研究较多的是DNA疫苗。它由编码能引起保护性免疫反应的病原体抗原的基因片段和载体构建而成。其被导入机体的方式主要是直接肌肉注射，或用基因枪将带有基因的金粒子注入。由于它不需任何化学载体，故又称裸DNA疫苗。但现在已有研究报道采用细菌载体等运送基因疫苗，即口服DNA疫苗，以期在黏膜局部免疫方面一展身手。

核酸疫苗于989年由美国Wolff及Vical偶然发现，99年Ulmer等将含流感病毒核心蛋白基因序列的重组质粒注射小鼠股四头肌，发现的确刺激产生了特异性的，能保护小鼠抵抗不同流感病毒株感染，从而赋予疫苗全新的含义：基因疫苗刺激机体产生免疫应答的过程类似于病原微生物感染或减毒活疫苗接种，其诱导产生的反应可以抵抗和清除病原体感染。以往对外膜蛋白容易变异的流感病毒、丙肝病毒及免疫缺陷病毒等缺乏有效疫苗，现在看来，它们的核心蛋白均非常保守，刺激机体产生的细胞免疫不仅可能预防不同病毒株的交叉感染，而且可能在治疗某些持续感染性疾病中有其积极的意义，所以基因疫苗克服了减毒活疫苗的可能返祖并导致人类和动物疾病及病毒发生变异而对新型的变异株不起作用的缺点。基因疫苗诱导的细胞免疫也可能用于抗肿瘤免疫。因此，DNA免疫的发现被视为疫苗业的一场革命，开辟了疫苗研究的新时代。

核酸疫苗除上述优点外，还具有以下明显优点：外源基因在体内存在较长时间，不断表达外源蛋白，持续给免疫系统提供刺激，因此能够刺激产生较强和较持久的免疫应答。核酸疫苗具有共同的理化特性，因此可以将含有不同抗原基因的质粒混合起来进行联合免疫。质粒载体没有免疫原性，因此可以反复使用。

DNA免疫已经成为世界瞩目的防治传染病、肿瘤以及移植免疫治疗的新的研究热点，并取得很好研究进展

目前，DNA免疫已经成为世界瞩目的防治传染病、肿瘤以及移植免疫治疗的新的研究热点，并取得很好研究进展。国外已有多家公司，开通了介绍核酸疫苗的网站，如．DNAvaccine.。有关核酸疫苗论文每年数以千计，与核酸疫苗相关的专利已超过0项。足以看出核酸疫苗的广泛的应用前景。迄今，国外已有至少4种核酸疫苗被批准进入Ⅰ期临床试验，包括美国、瑞士和英国的艾滋病核酸疫苗、美国的成纤维细胞生长