植物叶绿体基因工程的研究进展.pdfVIP

植物叶绿体基因工程的研究进展

植物细胞的遗传物质分别存在于细胞核和细胞器中。以细胞核为外源基因受体的传统植物基因

工程虽已发展趋于成熟并得到广泛运用，但仍存在一系列难以解决的问题：目的基因表达量不理想，

同时转入多个基因时操作步骤过于复杂，所表达的原核基因必须经过修饰改造，因位置效应的影响

需花费大量的精力筛选符合要求的转基因植株，环境安全难以保证等。叶绿体转化系统的出现为克

服这些困难带来了希望。

[1]

叶绿体基因工程是以叶绿体基因组为平台对植物进行遗传操作,通过一定方法使外源基因穿过

细胞膜和叶绿体双层膜进入叶绿体,在同源重组片段的介导下与叶绿体基因组之间发生同源重组,

以定点整合方式进入叶绿体基因组,在其中转录、翻译并获得终产物的技术。。叶绿体基因组是

120~160kb的裸露双链闭合环状DNA，通常由一对反向重复序列和大单拷贝区、小单拷贝区组成，

以多拷贝形式存在，内部碱基分布不均匀，GC含量为25%~38%，功能相关的基因多以“多顺反子”

形式存在（刘良式，1998）。仅于二十多年前人们才提出叶绿体作为外源基因受体的可能性，但

[1]

由于此新转化系统可超量表达目的基因，消除位置效应，并能有效防止目的基因对周围环境的污染，

因而自问世以来迅速在多个领域表现出旺盛的生命力，现已成功表达了抗虫基因，抗除草剂基因，

并已生产出具生物活性的人类生长激素蛋白。

1.叶绿体基因工程的建立及发展

1.1叶绿体基因工程的建立

为减轻目的基因大量表达对植物造成的危害，叶绿体很早已成为外源基因产物的储存场所。通

过在目的基因5端加上受体植物内源的导肽序列，利用核转化就可将基因的产物定位于叶绿体。但

这种方法首先要合成前体蛋白，然后在导肽的引导下穿过双层膜进入叶绿体，所经环节较多，且受

核转化系统自身缺点的限制，因而人们一直在寻找一种更为合适的表达系统。1987年，Klein等人

人建立了基因枪转化方法。1988年Boynoton等首次用野生型叶绿体DNA转化了单细胞生物衣藻突

变体（atPB基因突变体），使其完全恢复光合作用能力，标志着叶绿体基因工程的诞生。1990年外

源基因首次于高等植物叶绿体中获的瞬间表达（Danielletall,1990）。Ye等（1990）又对所创建的

[2]

轰击转化系统进行改进，建立了一种较为有效的叶绿体转化方法。

[2]

1.2叶绿体基因工程的发展及应用

叶绿体作为植物细胞光合作用中心以及转化受体所具备的特点必将使其成为植物基因工程的一

个十分重要的研究领域，其研究内容相当广泛。

1.2.1利用叶绿体转基因植物表达疫苗的研究

叶绿体转基因植物生产的疫苗保持了重组蛋白的理化特性和生物活性,有的不经提纯就能作为

一种可食疫苗(ediblevaccine)口服使用，这样对于疫苗的运输和推广极为有利。

利用叶绿体转基因植物表达疫苗的研究包括范国昌等（1999），张中林等（1999），山松等（2000）

对肝炎病毒抗原的研究。Daniell等(2001)对霍乱病毒蛋白B抗原的研究。Daniell等（2004）对鼠疫

疫苗抗原的研究。Tregoning等（2003）对破伤风(tetanus)病毒的研究，这项工作为利用植物生产安

全的破伤风口服疫苗奠定了基础。Sun等(2003）对口蹄疫(foot-andmouthdisease,FMD)病毒抗原的研

究，这项工作为运用衣藻叶绿体作为生物反应器,表达动物黏膜免疫疫苗提供了一条可行性途径。

1

Watson等(2004)，Koya等(2005)对炭疽抗原的研究。Molina等(2004,2005)对犬细小病毒抗原的研究

证实转基因植物的叶片提取物能够使鼠和兔产生抗体,这是通过叶绿体基因工程表达动物疫苗的首

例报道。

1.2.2利用叶绿体转基因植物表达药用蛋白的研究

多数药用蛋白的四维