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肺痿冲剂方对体外经转化生长因子-β1诱导A549细胞上皮-

间质转化信使单链核糖核酸表达的影响

阮越勇;张浩军;疏欣杨;张纾难

【期刊名称】《《环球中医药》》

【年(卷),期】2019(012)011

【总页数】5页(P1645-1649)

【关键词】肺痿冲剂方;A549细胞;上皮-间质转化;转化生长因子-β1

【作者】阮越勇;张浩军;疏欣杨;张纾难

【作者单位】100029北京中医药大学研究生院;国家呼吸疾病临床研究中心中日

友好医院呼吸中心中日友好医院中医肺病科;临床医学研究所

【正文语种】中文

【中图分类】R285.5

间质性肺疾病又称肺纤维化为呼吸系统的常见病和多发病，其发病机理未完全清楚

[1]。过去，大多数观点被认为各种损伤因素损伤肺泡上皮细胞和毛细血管内皮细

胞，炎症细胞浸润．细胞因子失衡，与进行性炎症诱导的肺间质细胞的激活和增殖

有关[2]。近些年来，越来越多的研究表明炎症不一定是纤维化纤维化的必要因素，

尤其是特发性肺纤维化和间质性肺炎。最近研究发现，肺泡上皮-间质充转化

(epithelial-mesenchymattransition，EMT)和信号传导通路在诱导肺纤维化中

的作用逐步获得了认可[3-4]。肺痿冲剂方是临床治疗肺纤维化的常用方剂，由西

洋参、三七、山茱萸、五味子、紫菀、麦冬、白果、炙甘草所组成，具有补益肝肾，

活血化瘀，止咳平喘的功效[5]。目前，临床研究报道肺痿冲剂方可以很好地改善

肺纤维化患者的症状、生活质量和肺功能，并且在高分辨CT前后对照，发现肺痿

冲剂短期治疗对特发性肺纤维化患者CT评分改善有一定的疗效[6]。因此，本研究

在A549细胞模型和转化生长因子-β1(transforminggrowthfactor-β1，TGF-

β1)诱导下，观察肺痿冲剂方对EMT现象mRNA表达的影响，进一步从分子角度

研究肺痿冲剂抑制方肺纤维化的作用特点。

1材料与方法

1.1细胞来源及培养

A549细胞株购于国家实验细胞资源共享平台，资源编号：

3111C0001CCC000002。用F-12培养基(含有100IU/mL青霉素，100mg/L

链霉素和10%胎牛血清)于37℃，5%CO2培养箱常规培养A549细胞，细胞汇合

达到70%～80%之后，用0.25%胰蛋白酶消化、传代或进行其他有关实验。

1.2药物

肺痿冲剂方由西洋参5g、三七3g、山茱萸10g、五味子6g、紫菀10g、麦

冬10g、白果10g、炙甘草6g组成。药物由中日友好医院药剂室提供，制作方

法：将中药饮片用玻璃器皿按1∶10比例煮沸，每次煎煮1～2小时，共煎2次，

2次煎出的药液合并滤液，在70℃条件下，加热浓缩，至药液浓度与药材重量

1∶2比例，继续浓缩至含水量15%～20%，即为稠膏粉，再干燥至含水量5%，

即为干浸膏，然后把干浸膏研磨成粉，即为浸膏粉。

1.3主要试剂与仪器

胎牛血清(美国Gibco公司)，货号：10099-141；胰酶(美国HyClone公司)，货

号：SH30042.01；二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)(美国Amresco公

司)，货号：0231；3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(3-(4,5-

Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT)(美国Sigma公

司)，货号：M2128-1G；转化生长因子-β1(humantransforminggrowth

factor-β1)(美国PeproTech公司)，批号:100-21-2；引物序列FN、Vim、E-

Cad(中国赛默飞世尔科技有限公司)；CO2培养箱(美国ThermoScientific)；酶

标仪(美国ThermoScientific)；倒置显微镜带荧光系统(日本OlympusIX71)；

双槽梯度PCR仪s1000(美国Bio-Rad)；7500Real-TimePCR仪(美国Thermo

Scientific)。

1.4方法

1.4.1分组模型制备、分组及干预方法取6孔培养板，每孔加入2.5mL的