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酶法拆分技术研究

作者：刘正威

来源：《管理观察》2009年第13期

摘要：生物酶法具有转化率及光学纯度高、成本低、反应条件温和、环境污染小等绿色工

艺优点，随着生物技术的不断发展，酶法拆分越来越广泛应用于手性药物的制备中。

关键词：酶手性药物拆分法

在有机药物合成及天然药物中，有许多具有手性碳或手性中心，因而具有光学异构体。结

构特异性药物是作用于受体、酶、蛋白质、离予通道等作用机制，在结构及电性效应上与这些

物质互补，而产生激动或拮抗作用，表现出不同的生理效应。因此，光学异构体往往在生物活

性上具有较大的差异。但目前临床应用的合成药物约有500多种为外消旋体，而单一对映体的

疗效高、副作用低，服用的剂量小，更符合临床应用要求。近几年手性药的年增长率已经超过

20%，2005年全世界上市的新药中约有60%为具有手性的单一对映体药物。因此，手性药物的

开发已非常重要。

手性药物的制备可采用不对称合成方法、生物酶法或经化学合一成方法先制备药物的消旋

体，然后再进行拆分而制得。消旋体药物的拆分有多种方法，传统拆分方法是采用手性拆分剂

与不同对映体一形成盐或复合物，根据其在溶剂中的不同溶解性进行分离，或采用物理方法进

行诱导析晶分离得到有效的单旋体。该方法具有拆分效，效率低，光学纯度差，另一单旋体需

要消旋化后进行再拆分，操作繁琐，配套设备多、拆分剂及溶剂的消耗量较大，拆分成本较

高。近年来上市的手性药物不断增长，手性药物的制备和拆分技术也有较，大的发展，如液相

酶法、固相酶法、不对称转换法、包结法等拆分技术，均较传统的拆分方法拆分效率高，且光

学纯度好，拆分成本低，对环境友好。

酶是一种高活性、高特异性和高立体选择性的催化剂，可催化多种化学反应。由于生物酶

有很高的对映体选择性，利用生物酶作催化剂拆分手性药物，具有选择性定向、拆分效率高、

光学纯度好的优点，可得到光学纯度很高的单对映体药物，这一方法优越。酶法拆分有液相酶

法和固相酶法两种，液相酶法是经微物发酵产生生物酶，直接利用其酶液进行拆分。固相酶法

是将酶埋或加载在载体物上，对药物进行拆分。固相酶法具有应用方便可反复多次应用的优

点。

例如心血管药物普萘洛尔的S(一)一异构体的疗效是R(+)一异构体的100倍，将昔荼洛尔

进行拆分得S(-)普萘洛尔。可降低剂量和副反应。普茶洛尔的制备是先采用化学方法合成得到

中间体2一丙醇酯，BevinaKatti等在有机溶剂中，利用脂肪酶PS对外消旋的萘氧氯丙醇酯进

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行水解得到S（-）一1一氯-3-(1一萘氧基)一2-丙醇(E。E，值大于95%)，最后与异丙胺缩合

得S(-)一普茶洛尔。

非甾体抗炎药萘普生的S(十)一构型在体内的抗炎活性是R(一)一构型的28倍，因此现临

床应用的主要是S(+)一萘普生。S(~-)一萘普生的制备是先合成得到消旋(±)一萘普生，然后用

化学法或酶法拆分而得。化学法拆分可以用碱性手性拆分剂，如奎宁、。葡辛胺、(，--a-g乙

胺等，与(±)一萘普生形成非对映体盐，然后根据其盐在溶剂中的溶解性不同分别拆分得到(R)

一对映体或(S)一对映体，再将?一对映体消旋化后重复拆分。该法操作步骤多、拆分剂回收损

失大、成本高，消耗大量溶剂，对环境污染也较。Battistel等采用固相酶技术，用固定于载体

AmberliteXADY上的柱状假丝酵母脂肪醇(liaisefrorn仂址idiocylindracea，CCL)对消旋萘普生

的乙氧基乙酯进行酶法水解拆分，得到光学纯的S(+)一萘普生，且酶的活性几乎没有损失，可

反复应用。辛嘉英等人将CCL固定在键合有不同疏水基团的多孔硅胶NWG-QH5、NWG-侧和

yWG-NH9上，制固定化脂肪酶，在含有磷酸缓冲溶液的异辛烷中~于37℃pH7.5条件下，对消

旋萘普生甲酯在连续流动搅拌反应器中进行酶拆分，产生S(十)一萘普生，产物对映体过量

95%。可连续化拆分，操作大为简化。

苯丙L-氨酸是合成药物的中间体，也是合成二肽甜味剂阿坦主要原料，可由光学拆分消旋

DL-苯氨酸甲酯制得。刘立建等人用多孔硅胶固定化a一胰凝乳蛋白酶，于35℃pH7条件下，

在甲苯一水两相中连续