细胞体外培养的基本方法和过程.pptVIP

不同的冷冻保护剂有不同的优、缺点。目前，有一种趋势，就是联合使用二种以上冷冻保护剂组成保护液。由于许多冷冻保护剂（如nMSO）在低温条件下能保护细胞，但在常温下却对细胞有害，故在细胞复温融解后要及时洗除冷冻保护剂。１、培养物的冷冻保存与复苏原理（４）冷冻保护剂第64页,共90页，星期六，2024年，5月２、冷冻保存的方法按照冷冻保护液在冻结后是否形成冰晶来划分，冻存方法可分为非玻璃化冻存和玻璃化冻存两种。非玻璃化冻存：利角各种温级的冰箱分阶段降温至-70～-80℃，然后直接投入液氮进行保存；或者是利用电子计算机程控降温仪以及利用液氮的气、液，按一定的降温速率从室温降至-100℃以下，再直接投入液氮进行保存的方法。以此种方法冻结的细胞悬液或多或少有冰晶形成。玻璃化冷冻：则是指利用多种高浓度冷冻保护剂组合成的玻璃化冷冻保护液悬浮细胞，直接投入液氮进行保存的方法。以此种方法冻结的细胞悬液无冰晶形成。第65页,共90页，星期六，2024年，5月３、冻存细胞的复苏（略）（１）非玻璃化冻存细胞的复苏方法（２）玻璃化冻存细胞的复苏方法（略）第66页,共90页，星期六，2024年，5月（二）继代培养（三）体外培养的基本方法和技术（四）培养物的冻存与复苏（五）培养物的污染（一）原代培养二、体外培养的基本方法