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遗传分析的一个基本原理是DNA的物理距离和遗传距离方
面...
7.28春季2001考试二
姓名
问题1_____/30分
问题2_____/20分
问题3_____/25分
问题4_____/25分
总共_____/100分
问题1.(30分)
1A(6分)遗传分析的一个基本原理是DNA的物理距离和遗传距
离方面的距离(举例来说,在一张遗传图谱上的距离)在整个的基因组上
通常是成比例的。虽然一些区域不寻常地表现出或高或低的重组频率,
基因组的所有区域都能够参与同源重组。基于你对同源重组机制的认
识,列出两个能够用来使所有的DNA序列都参与同源重组的过程的特
点。并解释你的答案。
请阅读以下实验内容,然后回答问题。
虽然重组频率在整个染色体上是相当一致的,针对特定的染色体
区域的详细分析表明那一些区域存在着远高于一般的重组频率,而其他
区域重组频率要低得多。你决定在大肠杆菌中研究这种现象,以揭示
负责这些“热点”与“冷点”区域的分子机制。
实验步骤的设计如下所示。你通过进行噬菌体调谐的转导在染色
体的8个区域检测同源重组的频率。受体菌有多种营养缺陷型标记,
意味着在8个区域中的每一个区域,都有一个缺陷基因。供体菌则有
这些缺陷基因的野生型等位基因。
受体菌:his-,trp-,lac-,ara-,val-,leu-,thi-,ura-
供体菌:his+,trp+,lac+,ara+,val+,leu+,thi+,ura+
转导的噬菌体生长在供体细胞上,噬菌体随机地包装供体细胞染
色体基因组50kd
区域。这些噬菌体再用来转染受体细胞,因此将供体细胞的染色
体区域介导进去。如果在外来DNA和受体宿主细胞染色体之间的重组
是成功的,那么,受体细胞将获得一个野生型的等位基因。下面是就
每一个染色体定位上观察到的重组频率表。
表1:野生型重组子的频率:
区域1His+0.2%
区域2Trp+0.2%
区域3Lac+0.02%
区域4Ara+0.2%
区域5Val+0.02%
区域6Leu+0.6%
区域7Thi+0.2%
区域8Ura+0.2%
为了探究重组频率或高或低的机制,你决定更详细地研究区域
1,3,5,和6。为了做到这一点,你重复了相同类型的体内重组分析。这
一次与前面不同的是,受体菌在以下位点还带有一个突变:recB,
recD或ruvC。下面是反映实验结果的一张表格。在每一个实验中,
野生型重组的频率(举例来说.His+代表区域1)如表一所示。
表2:野生型重组子的频率:
在受体菌中的突变
recBrecDruvC
区域10.001%0.6%0.001%
区域30.001%0.12%0.001%
区域50.001%0.6%0.001%
区域60.001%0.6%0.001%
1B(4分).基于这些发现,就表1中区域5观察到的异常重组频率,
建议一个可能的机制。列出你模型的实验证据。
1C(4分).就表1区域6中所显示的异常高的重组频率,给出一个
可能的机制。列出你模型的实验证据。
1D(10分)为了更进一步探究机制,你从区域5中分离了一个15
kb片段,从区域6中分离了一个15kb片段。使用纯化的RecBCD酶
系统在体外混合这两种DNA片段进行反应。请图示DNA底物(表上
重要的特征)和DNA产物,你的图示应该大致成比例
。没有必要画一块胶,仅仅用一条线代表DNA即可。如果最终
RecBCD酶系统产生的DNA产物是RecA的适宜底
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