遗传分析的一个基本原理是DNA的物理距离和遗传距离方面....pdfVIP

遗传分析的一个基本原理是DNA的物理距离和遗传距离方

面...

7.28春季2001考试二

姓名

问题1_____/30分

问题2_____/20分

问题3_____/25分

问题4_____/25分

总共_____/100分

问题1.(30分)

1A(6分)遗传分析的一个基本原理是DNA的物理距离和遗传距

离方面的距离(举例来说,在一张遗传图谱上的距离)在整个的基因组上

通常是成比例的。虽然一些区域不寻常地表现出或高或低的重组频率,

基因组的所有区域都能够参与同源重组。基于你对同源重组机制的认

识，列出两个能够用来使所有的DNA序列都参与同源重组的过程的特

点。并解释你的答案。

请阅读以下实验内容，然后回答问题。

虽然重组频率在整个染色体上是相当一致的，针对特定的染色体

区域的详细分析表明那一些区域存在着远高于一般的重组频率,而其他

区域重组频率要低得多。你决定在大肠杆菌中研究这种现象，以揭示

负责这些“热点”与“冷点”区域的分子机制。

实验步骤的设计如下所示。你通过进行噬菌体调谐的转导在染色

体的8个区域检测同源重组的频率。受体菌有多种营养缺陷型标记，

意味着在8个区域中的每一个区域，都有一个缺陷基因。供体菌则有

这些缺陷基因的野生型等位基因。

受体菌：his-,trp-,lac-,ara-,val-,leu-,thi-,ura-

供体菌：his+,trp+,lac+,ara+,val+,leu+,thi+,ura+

转导的噬菌体生长在供体细胞上，噬菌体随机地包装供体细胞染

色体基因组50kd

区域。这些噬菌体再用来转染受体细胞，因此将供体细胞的染色

体区域介导进去。如果在外来DNA和受体宿主细胞染色体之间的重组

是成功的，那么，受体细胞将获得一个野生型的等位基因。下面是就

每一个染色体定位上观察到的重组频率表。

表1：野生型重组子的频率：

区域1His+0.2%

区域2Trp+0.2%

区域3Lac+0.02%

区域4Ara+0.2%

区域5Val+0.02%

区域6Leu+0.6%

区域7Thi+0.2%

区域8Ura+0.2%

为了探究重组频率或高或低的机制，你决定更详细地研究区域

1,3,5,和6。为了做到这一点，你重复了相同类型的体内重组分析。这

一次与前面不同的是，受体菌在以下位点还带有一个突变：recB，

recD或ruvC。下面是反映实验结果的一张表格。在每一个实验中，

野生型重组的频率(举例来说.His+代表区域1)如表一所示。

表2：野生型重组子的频率：

在受体菌中的突变

recBrecDruvC

区域10.001%0.6%0.001%

区域30.001%0.12%0.001%

区域50.001%0.6%0.001%

区域60.001%0.6%0.001%

1B(4分).基于这些发现，就表1中区域5观察到的异常重组频率，

建议一个可能的机制。列出你模型的实验证据。

1C(4分).就表1区域6中所显示的异常高的重组频率，给出一个

可能的机制。列出你模型的实验证据。

1D(10分)为了更进一步探究机制，你从区域5中分离了一个15

kb片段，从区域6中分离了一个15kb片段。使用纯化的RecBCD酶

系统在体外混合这两种DNA片段进行反应。请图示DNA底物（表上

重要的特征）和DNA产物，你的图示应该大致成比例

。没有必要画一块胶，仅仅用一条线代表DNA即可。如果最终

RecBCD酶系统产生的DNA产物是RecA的适宜底