pcDNA3.0-SV40T重组质粒的构建及其在鹅小肠上皮细胞中的表达的开题报告.pdfVIP

pcDNA3.0-SV40T重组质粒的构建及其在鹅小肠上

皮细胞中的表达的开题报告

一、研究背景及意义

家禽是我国畜禽养殖行业的重要组成部分，在畜禽养殖中会遭

受病原微生物的威胁。为了防治家禽疫病，提高家禽健康水平和产出效

益，研究生产性能和疾病抗性相关基因的功能对于家禽的育种和保健具

有重要的意义。

鹅小肠上皮细胞是家禽肠道的重要组成部分，能够维持肠道粘膜屏

障的完整性、吸收营养物质和分泌免疫因子等多种功能。因此，研究鹅

小肠上皮细胞中的基因表达及其功能对于了解家禽肠道生理和疾病发生

机理具有重要的意义。

病毒T抗原（SV40T）是一种常用的转录调控元件，被用于重

组质粒的构建和外源基因的高效表达。本研究将构建一个含有SV40T转

录调控元件的pcDNA3.0载体，用于鹅小肠上皮细胞中外源基因的表达，

为研究鹅小肠上皮细胞生理和疾病提供基础工具。

二、研究内容和方法

1.构建pcDNA3.0-SV40T重组质粒：

（1）用PCR方法扩增SV40TDNA序列，引物序列如下：

前引物：5-GCAAGCTTATGAGTCAGACTGATTG-3（含有HindIII限

制酶切位点）

后引物：5-CCCAAGCTTTTAAGCGGCCGCTATCAC-3（含有HindIII

限制酶切位点）

（2）用限制酶HindIII对pcDNA3.0载体和PCR扩增产物进行双酶

切，将SV40TDNA序列插入pcDNA3.0载体中。

（3）提取pcDNA3.0-SV40T质粒DNA并通过限制酶切、PCR扩增

和测序等技术进行验证。

2.应用pcDNA3.0-SV40T重组质粒进行鹅小肠上皮细胞中外源基因

的表达：

（1）将所需外源基因的DNA序列插入到pcDNA3.0-SV40T载体中。

（2）将pcDNA3.0-SV40T载体介导的外源基因转染鹅小肠上皮细胞

中，并分别应用Real-timePCR和Westernblot分析外源基因的转录和翻

译水平。

三、预期结果和意义

本研究将成功构建一个含有SV40T转录调控元件的pcDNA3.0载体，

并通过转染鹅小肠上皮细胞验证其在外源基因表达上的效果。该重组质

粒可以为研究鹅小肠上皮细胞中基因表达与功能提供基础工具。同时也

为后续研究和开发家禽病害防治和育种提供基础支持。