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《免疫学实验技术》实验讲义修订版20xx

亲们：

曾老师发来的实验讲义，请下载打印，每次课带相应的讲义。

1.下周一实验1点开始，切记时间不要迟到哟。

2.作业：第一次（今天）的实验报告，还有“大吞噬”和小吞噬的图。

3.漂亮美女们要把头发扎好，为自己的健康着想哟。

实验一小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验

【原理】吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能，在机体固有免疫中发挥重要作用。

【目的】

1.通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及其

意义。

2.掌握小鼠腹腔注射给药和摘眼球放血及脊椎脱臼处死的方法。

【材料】小鼠、2％鸡RBC（CRBC）、尖吸管、玻片、瑞氏染液、眼科剪、弯头眼科镊、1mL注射器

【方法】10％的硫乙醇酸钠溶液腹腔注射1ml（诱导腹腔巨噬细胞大量渗出）4d）2％CRBC腹腔注射1ml

45min）

轻揉腹部1min，剪开表皮，暴露腹膜，剪一小口，取腹腔液（用尖吸管）滴于玻片一端

推片（自然干燥）

瑞氏染色（10min）

冲洗，印干，镜检

【注意事项】

⒈腹腔注射时勿注入皮下；

⒉染色时玻片勿互相碰触；

⒊观察时注意玻片正反面。

结果：吞噬百分率＝吞有SRBC的吞噬细胞/100个吞噬细胞×100％

吞噬指数＝所吞SRBC数/100个吞噬细胞

1

附：

⒈2%CRBC悬液的制备：吸取在阿氏液中保存的CRBC沉淀0.3mL，置于玻璃试管内，加入2mL生理盐水，混匀，2000rpm,5min离心，此为洗涤红细胞。离心毕，观察上清，如无溶血现象，即可弃上清，取红细胞沉淀（即为压积红细胞）0.2mL，移入15mL离心管中，以10mL注射器吸取生理盐水10mL加入，混匀，即为2%CRBC悬液。若洗一次后仍可见溶血现象，则重复第一步，直至无溶血发生，方可配制实验用红细胞悬液。

⒉摘取胸腺，脾脏。均为重要的免疫器官，做动物实验获取免疫细胞的重要来源示教片：

大吞噬实验：即本实验结果；

小吞噬实验：外周血嗜中性粒细胞吞噬葡萄球菌（标本片示教）

实验二淋巴细胞转化实验（MTT法）

一、原理：

四甲基偶氯唑盐（MTT）可作为线粒体中琥珀酸脱氢酶的底物。当有活细胞存在时，线粒体内琥珀酸脱氢酶可将淡黄色的MTT还原成紫兰色的甲臢，将结晶的甲臢溶解释放后，可根据所测的OD值反映活细胞的数量和活性，从而推知待测样品的水平。

二、材料：

小鼠、鼠板、眼科剪、眼科镊、75%乙醇湿棉球、小平皿、200目筛网、研棒（注射器针芯）、细胞计数板、盖玻片、加样器（1mL、200uL、20uL）及枪头、96孔血凝板、15mL离心管、4mLEP管、96孔板、白细胞计数液、MTT、ConA、无菌PBS、Tris-NH4Cl、完全1640(含10%FBS、1%双抗)、0.01NHCl-10%SDS、无菌针头过滤器、10mL注射器、废物（液）缸、冰浴、无菌操作台、CO2培养箱，显微镜、酶标仪，冰箱、低温离心机。

试剂的准备：

1.MTT：称取50mg的MTT，溶于10mlPBS后，终浓度为5mg/ml，过滤除菌，无菌EP管分装，1mL/管，-20℃避光保存。

2.ConA：25mg/瓶，Sigma出品。取25mg，溶于25mLPBS中，终浓度为1mg/mL，过滤除菌，无菌EP管分装，1mL/管，-20℃保存。用时取1mL，以无菌PBS稀释为100ug/mL（即稀释10倍）。

3.PBS：取市售配好的PBS粉末一袋，加1000mL蒸馏水，混匀，高压或过滤除菌，4℃保存。