感染性疾病的诊断.pptVIP

感染性疾病的诊断感染性疾病的诊断第1页

分子诊疗临床意义在于不但能够对疾病作出早期诊疗、确切诊疗，而且还能确定个体归于疾病易感性以及疾病分期分型、疗效监测、预后判断等。伴随分子诊疗学发展，分子诊疗原理和方法不但适合用于遗传性疾病，而且也广泛应用于感染性疾病、肿瘤等医学领域。从生物中心法则来看，分子诊疗包含检测基因结构异常和基因表示异常。常见分子诊疗方法以下:感染性疾病的诊断第2页

DNAmRNA蛋白质转录反转录翻译PCRDNA测序Southern-blot基因芯片基因结构异常基因表示异常RT-PCRFQ-PCRNothern-blot基因芯片ELISAWestern-blot组织化学染色蛋白质芯片中心法则检测方法感染性疾病的诊断第3页

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第十四章

感染性疾病分子诊疗生物化学与分子生物学学科.4

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第一节概述感染性疾病:由某种病原体所致，经过不一样方式引发人体发生感染并出现临床症状疾病。病原体:病毒、细菌、原虫、支原体、衣原体、立克次体。感染性疾病的诊断第6页

常规检测方法:免疫学方法微生物学方法受敏感性、特异性限制，不易早期诊疗，而且不易提供病原体分型及耐药性方面信息。感染性疾病的诊断第7页

分子生物学方法:聚合酶链式反应（PCR）核酸杂交基因芯片早期、特异地进行诊疗，能提供病原体分型及耐药性方面信息，同时进行大量基因检测。感染性疾病的诊断第8页

一、感染性疾病分子诊疗，其诊疗策略能够分为以下两种:普通性检出策略,即只需要提供是否有某种病原体感染；完整检出策略,即不但对病原体做出诊疗,还要进行分型（包含亚型）和耐药性方面检测。感染性疾病的诊断第9页

1.普通性检出策略和方法针对特异性核酸序列进行核酸分子探针杂交,或者利用常规PCR技术直接检出微生物DNA/RNA,它能够判断有没有感染和是何种病原体感染。感染性疾病的诊断第10页

2.完整检出策略和方法按照诊疗→分型→亚型→耐药性检测思绪,利用各种分子诊疗伎俩对感染性病原体进行分析。基因芯片、基因测序等感染性疾病的诊断第11页

二、感染性疾病分子诊疗常见方法依据目标基因是否被放大，可分为杂交法和扩增法。信号放大技术检测方法靶分子数目不变，而检测探针信号放大采取多酶、多探针或二者结合等方法来增加探针标志物浓度使检测信号得到放大。靶分子扩增技术检测方法靶分子（RNA.DNA或探针）扩增PCR、替换扩增、LCR等感染性疾病的诊断第12页

分支链DNA信号放大技术(bDNA)感染性疾病的诊断第13页

nucleicacidsequence-basedamplification(NASBA)感染性疾病的诊断第14页

Figure1.TargetgenerationschemeforSDA.ThisfiguredepictstheinitialstepsinanSDAreactionwhichtransformtheoriginaltargetsequenceintotheamplificationcycledepictedinFigure2.Figure2.TheSDAreactioncycle.Thesereactionstepscontinuouslycycleduringthecourseofamplification.感染性疾病的诊断第15页

引物A靶RNA引物BRNAcDNART355535353cDNAcDNA模板553353引物BRNAseHRTT7RNA聚合酶100-1000RNA扩增子物A355RNAseHRNARNAcDNAcDNA图8-3NASBA原理示意图引物A5’端带有T7RNA聚合酶结合位点,3’端碱基与靶RNA3’端序列互补;引物B碱基序列与cDNA3’端序列互补感染性疾病的诊断第16页

三、感染性疾病分子诊疗标本处理标本采集处理主要包含选择适当标本种类、标本量、抗凝剂等及对标本进行适当传送、保留和预处理。感染性疾病的诊断第17页

四、感染性疾病分子诊疗结果解释1.阴性结果假阴性可能性方法灵敏度太低方法失败目标分子2.阳性结果假阳性可能性方法特异性受