细胞衰老课件.pptVIP

TargetedApoptosisofSenescentCellsRestoresTissueHomeostasisinResponsetoChemotoxicityandAgingCellBaaretal.,2017,Cell169,132–147March23,2017a2017ElsevierInc.1

DNA损伤修复ApoptosisSenescenceor背景介绍清除持续累积加速疾病、衰老（衰老细胞）2

退出细胞周期；形成持续的促炎表型——衰老相关分泌表型（senescence-associatedsecretoryphenotype,SASP）；影响组织微环境；早期对于创伤愈合有利。衰老细胞:正常细胞受到不可修复的压力后形成的持续的损伤状态。年轻组织中:少量衰老细胞分泌SASP，诱导多能性干细胞形成分化并促进组织修复。SASP影响干细胞信号转导以及分化。IL-1:抑制干细胞分化；IL-6:诱导并维持干细胞多能性。3

衰老组织中:衰老细胞大量堆积，并分泌SASP，致使其邻近细胞被封锁于持续的类干性样的去分化状态，不能进行分化或组织修复。衰老-干性加锁模型:清除衰老细胞有利于恢复组织稳态、延缓衰老？Q4

FOXOs家族:（ForkheadboxOfamily,叉头框转录因子O家族)。作为insulin/IGF信号通路的靶基因,调节体内的抗氧化反应以及DNA损伤修复。如何靶向衰老细胞:5

FOXO4在衰老细胞中表达上调,并维持其活性；FOXO4-DRI扰乱PML/DNA-SCARS,衰老细胞释放激活的p53；FOXO4-DRI选择性并强力靶向衰老细胞进入p53依赖的凋亡；FOXO4-DRI对抗化疗药引起的衰老；FOXO4-DRI抗衰老以及抵抗快速衰老XpdTTD/TTD小鼠脆弱的特征；FOXO4-DRI逆转快速衰老小鼠肾功能下降；FOXO4-DRI减轻自然衰老小鼠的衰弱以及肾功能下降。实验结果6

FOXO4在衰老细胞中表达上调,并维持其活性；衰老细胞模型:IMR90原代人成纤维细胞（基因组稳定），电离辐射（IR）诱导细胞衰老。凋亡相关信号通路的变化？促凋亡因子PUMA,BIM显著上调；抗凋亡因子Blc-2减少。“刹车”衰老细胞存活的关键？Q7

凋亡相关的转录因子:STAT1/2/4,NF-kB,TP53,FOXO4XXX8

慢病毒shRNA沉默FOXO4促进衰老细胞凋亡。结论:FOXO4通过抑制凋亡通路促进衰老细胞的存活。9

FOXO4-DRI扰乱PML/DNA-SCARS,衰老细胞释放激活的p53；衰老细胞内FOXO4募集至常染色质区。设计化合物干扰FOXO4的功能。10

衰老细胞中，PML小体与含53BP1的DNA-SCARS（染色质改变增强衰老DNA片段）融合并联合调节衰老相关分泌表型SASP的表达。p53:调节凋亡及衰老，并定位于DNA-SCARS，被ATM于Ser15位磷酸化，阻断MDM2介导的降解。高分辨结构显微镜FOXO4结合在PML小体上,与含53BP1的DNA-SCARS紧密相邻。FOXO4与pSer15-p53紧密相邻。11

设计多肽:选择FOXO4-p53相互作用的结构域，且与FOXO1，3不重叠，在人与小鼠中均保守。FOXO4-DRI:FOXO4肽的D-retroinverso（DRI）异构型，即利用D型氨基酸取代肽链中正常L型氨基酸，并且反转这种肽链主骨架的方向。12

NMR-滴定法:将重组p53的N末端结构域滴定至1H，15N-标记的FOXO4的Forkhead结构域的溶液中，会导致1H，15NHSQC的交叉峰的化学位移，表明p53与FOXO4特异性结合，逐步滴加FOXO4-DRI肽使FOXO4的化学位移恢复至未结合状态。说明FOXO4-DRI肽可以竞争性与FOXO4结合，且较p53亲和力更高。13

FOXO4-DRI肽与HIV-TAT（亲水序列）融合:通过形成暂时的孔隙促进非能量依赖的FOXO4-DRI的摄取。摄取:14

FOXO4可调节衰老细胞中p21cip1的表达,通过p21cip1,p53可诱导p16in4a不依赖的细胞周期阻滞,并通过转位至线粒体内激活促凋亡基因的表达。Cdkn1a:p21Cip1的编码基因的启动子。其中两个p53结合位点中间包含一段FOXO的靶序列。FOXO4-DRI对于p21Cip1以及p53的作用？FOXO4-DRI减少衰老相关的p21Cip1的表达。促进p53聚积并促进活化的pSer15-p53的核外排。结论:FOXO4-DRI干扰FOXO